早期宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移分子機(jī)制研究及其預(yù)測(cè)概率模型的建立.pdf

1、目的：進(jìn)行早期宮頸癌532例的回顧性分析，研究宮頸癌轉(zhuǎn)移與其預(yù)后因素的關(guān)系。利用全基因cDNA微陣列(基因芯片技術(shù))篩查早期宮頸鱗癌(SquamousCervicalCarcinoma，SCC)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，系統(tǒng)分析差異表達(dá)基因與早期宮頸鱗癌淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的運(yùn)動(dòng)、黏附水解及新生血管生成的關(guān)系。進(jìn)一步從基因(mRNA)水平和蛋白水平檢測(cè)黏附分子、基質(zhì)金屬蛋白酶、S100A4在SCC中的表達(dá)，探討這些生物大分子在宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移的黏附、水解

2、過(guò)程中的作用機(jī)制。建立預(yù)測(cè)早期SCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率模型，嘗試對(duì)早期預(yù)測(cè)SCC的淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移、判斷預(yù)后、尋找個(gè)體化治療方案、提高患者的生活質(zhì)量及抗腫瘤治療提供理論依據(jù)。方法：首先進(jìn)行了早期宮頸癌532例的回顧性分析，采用多元回歸對(duì)其預(yù)后因素進(jìn)行分析。在回顧性分析結(jié)論的基礎(chǔ)上，利用cDNA微陣列篩查Ⅰb期SCC轉(zhuǎn)移相關(guān)基因，然后采用反轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈反應(yīng)(reversetranscriptionpolymerasechainreaction，R

3、T-PCT)和免疫組織化學(xué)法(Immunohistochemistry，IHC)檢測(cè)21例正常宮頸上皮、23例有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和63例無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移Ⅰb～Ⅱa期SCC中的黏附分子(CD44V6，上皮型鈣黏附素(E-cadherin，E-cad)，整合素αvβ3，整合素α2，間隙連接蛋白43(connexin43，Cx43))，基質(zhì)金屬蛋白酶(Matrixmetalloproteasen，MMP：MMP-2、MMP-9及其抑制物(tissuei

4、nhibitorofmetalloproteinase，TIMP)，MMP-7及轉(zhuǎn)錄因子ETV5，膜型基質(zhì)金屬蛋白酶1(membranetype1-matrixmetalloproteinase，MT1-MMP))，S100A4鈣結(jié)合蛋白的表達(dá)情況，分析上述指標(biāo)與SCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的關(guān)系、S100A4鈣結(jié)合蛋白與各分子之間的相關(guān)性及其在SCC中聯(lián)合表達(dá)的作用，最后通過(guò)應(yīng)用組織芯片進(jìn)行早期SCC(Ⅰb～Ⅱa期，轉(zhuǎn)移63例，無(wú)轉(zhuǎn)移63例)的淋

5、巴結(jié)轉(zhuǎn)移相關(guān)因素多元回歸分析，用Logistic逐步回歸法建立預(yù)測(cè)早期SCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的概率模型。 結(jié)果：(1)經(jīng)cDNA微陣列檢測(cè)，發(fā)現(xiàn)無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移SCC組織的差異表達(dá)基因9185個(gè)，2倍差異表達(dá)基因677個(gè)，其中在有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移SCC組織中表達(dá)上調(diào)494個(gè)，下調(diào)183個(gè)，己知基因497個(gè)，表達(dá)序列標(biāo)簽(expressedsequencetags，EST)61個(gè)。表達(dá)增加的基因主要有代謝、發(fā)育、信號(hào)傳導(dǎo)傳遞基因等，

6、表達(dá)降低的基因主要有發(fā)育、分化、信號(hào)傳導(dǎo)傳遞基因等。(2)黏附分子、基質(zhì)金屬蛋白酶的RT-PCR、IHC結(jié)果經(jīng)統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，CD44v6，E-cad，整合素αvβ3，整合素α2，Cx43，MMP-2，MMP-9，TIMP-1，TIMP-2，MMP-7，ETV5，MT1-MMP，S100A4鈣結(jié)合蛋白在無(wú)淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移和有淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的SCC組織的表達(dá)有顯著差異(P＜0.05)，其中E-cad、Cx43、TIMP-1、TIMP-2在有轉(zhuǎn)移SCC為

7、表達(dá)下降，其余為表達(dá)上升。(3)SCC中S100A4鈣結(jié)合蛋白與整合素αvβ3、整合素α2、MMP-2、MMP-9的表達(dá)之間有明顯的正相關(guān)性(P＜0.05)。(4)對(duì)10項(xiàng)可能影響SCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的相關(guān)指標(biāo)進(jìn)行Logistic逐步回歸分析，結(jié)果發(fā)現(xiàn)年齡、臨床分期、腫瘤大小、癌栓、MMP-9所對(duì)應(yīng)的回歸系數(shù)無(wú)顯著意義而排除，而E-cad、整合素αvβ3、TIMP-1、MMP-7、S100A4所對(duì)應(yīng)的回歸系數(shù)有顯著意義而進(jìn)入概率模型?？梢?jiàn)E

8、-cad、整合素αvβ3、TIMP-1、MMP-7、S100A4可能是影響早期SCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移的主要因素。 結(jié)論：：(1)回顧性分析發(fā)現(xiàn)，早期宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移是其預(yù)后的主要因素，與患者的生存率密切相關(guān)。(2)cDNA全基因表達(dá)芯片結(jié)果表明早期宮頸癌淋巴轉(zhuǎn)移涉及了多個(gè)生物學(xué)過(guò)程，進(jìn)一步可以推斷早期SCC的淋巴轉(zhuǎn)移是一個(gè)多基因、多階段過(guò)程，與癌細(xì)胞的運(yùn)動(dòng)、黏附水解、血管生成有關(guān)。(3)黏附分子(CD44V6，E-cad，整合素αvβ3

9、，整合素α2，Cx43)、基質(zhì)金屬蛋白酶(MMP-2、MMP-9及TIMP，MMP-7，MT1-MMP)、ETV5、S100A4鈣結(jié)合蛋白在早期SCC中的表達(dá)與淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移有關(guān)，分別參與了早期SCC細(xì)胞的黏附力的改變和基質(zhì)降解，在SCC的侵襲轉(zhuǎn)移中發(fā)揮了重要的作用。S100A4鈣結(jié)合蛋白與整合素αvβ3、整合素α2、MMP-2、MMP-9在早期SCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中的表達(dá)有明顯的正相關(guān)性，說(shuō)明它們之間在促進(jìn)SCC淋巴結(jié)轉(zhuǎn)移中存在內(nèi)在關(guān)聯(lián)性，進(jìn)