龍膽苦苷和龍膽堿的分離純化及生物活性研究.pdf

1、龍膽為龍膽科植物龍膽Gentiana scabra Bge、條葉龍膽G. manshurica Kitag、三花龍膽G. triflora Pal1、或滇龍膽 G. rigescens Franch的干燥根和根莖。前三種習(xí)稱“龍膽”，后一種習(xí)稱“堅(jiān)龍膽”。龍膽是著名的保肝藥物，現(xiàn)代研究表明主要藥用成分為龍膽苦苷，而后續(xù)文獻(xiàn)則報(bào)道稱龍膽苦苷經(jīng)體內(nèi)代謝后產(chǎn)生一種重要的生物活性成分龍膽堿。龍膽堿并非龍膽藥材原生的化學(xué)成分，然而卻與龍膽苦苷具有

2、相似的藥理作用。隨后的藥理研究還表明龍膽堿的某些生物活性強(qiáng)于龍膽苦苷，故一些研究者推測龍膽可能是通過龍膽苦苷在體內(nèi)代謝產(chǎn)物——龍膽堿而發(fā)揮的生物活性，也可能是通過龍膽苦苷和龍膽堿在體內(nèi)的相互協(xié)同作用而發(fā)揮的生物活性。所以，本課題在獲得龍膽苦苷和龍膽堿的單體化合物后，對二者的藥理作用進(jìn)行了深入研究，探討龍膽堿的藥用價(jià)值，擴(kuò)大龍膽的臨床藥用范圍。主要內(nèi)容如下：
　　1、本課題組以堅(jiān)龍膽藥材為原料，首先采用高效液相色譜法，測得龍膽中龍膽

3、苦苷的平均含量為1.706％。其次利用大孔吸附樹脂進(jìn)行富集、粗分離，利用MCI GEL進(jìn)行純化，獲得了純度大于95%的龍膽苦苷。
　　2、以高效液相色譜（HPLC）法和薄層色譜（TLC）法為檢測手段，對堅(jiān)龍膽藥材進(jìn)行研究，加氨水浸泡、提取、萃取、濃縮，加倍量水混懸，然后用1%的鹽酸水溶液溶解，經(jīng)陽離子交換樹脂色譜進(jìn)行分離、富集龍膽堿，利用硅膠柱層析進(jìn)行純化，重結(jié)晶，得到純度大于95%的龍膽堿。
　　3、利用經(jīng)典的藥物二倍稀釋

4、法和菌落計(jì)數(shù)法相結(jié)合的實(shí)驗(yàn)方法，考察龍膽藥材醇提物、粗生物堿，龍膽苦苷及龍膽堿對革蘭氏陰性菌和革蘭氏陽性菌（主要代表菌大腸埃希桿菌、金黃色葡萄球菌、銅綠假單胞菌、白色念珠菌）的抑菌活性并確定了各自的最低抑菌濃度（MIC）。
　　4、用LPS誘導(dǎo)RAW264.7巨噬細(xì)胞，建立細(xì)胞炎癥反應(yīng)模型，選擇一氧化氮（NO）為測定指標(biāo)，探討粗生物堿、龍膽苦苷、龍膽堿對LPS誘導(dǎo)的RAW264.7巨噬細(xì)胞一氧化氮（NO）釋放量的影響，并對它們的活