載血卟啉脂質微泡的制備與治療兔肝VX2腫瘤的實驗研究.pdf

1、原發(fā)性肝癌是消化系統(tǒng)常見的惡性腫瘤。目前肝癌首選的治療方案仍然是手術切除，但手術切除率低，術后復發(fā)率高，因此化療常常是可供選擇的主要治療方法和手段。腫瘤化療藥物大多為細胞毒性藥物，對惡性腫瘤細胞和正常組織細胞缺乏特異性和靶向性，具有較大的毒副作用。因此尋求一種簡便、安全、有效、可重復使用的局部化療技術是研究的熱點和難點。聲動力療法是利用超聲具有深部穿透并能聚焦于腫瘤局部的能力，化學激活相對無毒的聲敏劑分子，產生單線態(tài)氧和（或）自由基，有

2、針對性地殺傷腫瘤細胞，被認為是一種很有推廣前景的物理療法，但存在聲敏劑在組織內分布不理想的缺點。最近研究發(fā)現(xiàn)，超聲靶向破壞載藥微泡定位釋放技術是一種新型無創(chuàng)的靶向治療技術，可以使藥物在靶組織內局部釋放并能促使藥物進入靶細胞內，為克服聲動力療法的不足提供了新的思路。近幾年，聲動力治療學和超聲靶向破壞載藥微泡定位釋放技術的研究都取得巨大的進步，且產生生物學效應的基礎均為空化效應，因此我們試想利用微泡破裂所致的空化效應增強血卟啉的聲動力效果。

3、因此本研究旨在制備出一種新型的載血卟啉的脂質超聲微泡造影劑，檢測其粒徑大小、濃度、穩(wěn)定性、包封率、顯像效果以及進行聯(lián)合應用超聲和載血卟啉微泡治療兔肝VX2腫瘤療效的觀察與機理的探討，為超聲介導載聲敏劑微泡在特定組織內的藥物治療提供實驗基礎。本課題研究主要包括以下兩個部分的內容： 第一部分載血卟啉脂質微泡的制備及一般特性研究 目的：制備一種載聲敏劑的脂質超聲微泡并測定其粒徑大小、濃度、包封率、觀察其體內超聲顯像效果。

4、 方法：采用機械振蕩的方法制備載血卟啉的脂質超聲微泡，用熒光分光光度儀測定其包封率，用倒置顯微鏡及馬爾文激光粒徑測量儀測量粒徑大小、分布和Zeta電位；觀察60Coγ射線滅菌前后造影劑外觀、形態(tài)、濃度和平均粒徑的改變，并觀察其在兔肝內的顯像效果。 結果：載藥脂質微泡的濃度為（3.24±0.49）×109/ml，粒徑范圍為1.5～5.3μm，平均粒徑為2.8±0.4μm；載血卟啉脂質微泡的包封率為30.25±4.45％；Zeta

5、電位為-（15.4±2.4）mV。經(jīng)60Coγ，射線滅菌后觀察微泡形態(tài)、粒徑及包封率無明顯變化，其平均粒徑大小及包封率分別為2.2±0.3μm，27.39±2.91％。靜脈注射此載藥微氣泡后，小鼠肝臟可見良好、持續(xù)的增強顯像效果。 結論：采用機械振蕩法制備的載血卟啉脂質微泡，包封率較高，粒徑分布均一，體內顯像效果好，有望實現(xiàn)實時監(jiān)控下的體內定點靶向給藥。 第二部分超聲聯(lián)合載血卟啉微泡治療兔肝VX2腫瘤的試驗研究

6、第一節(jié)免肝VX2腫瘤模型的建立及超聲監(jiān)測口 目的：探討兔肝VX2腫瘤模型的建立方法及超聲檢查對腫瘤的監(jiān)測。 方法：采用瘤塊肝內種植法建立兔肝VX2腫瘤模型，病理解剖驗證VX2瘤株在兔肝臟的成瘤情況；用2DUS、CDFI及CEUS觀察腫瘤的大小、回聲、血流灌注及生長特點，從而評估超聲在兔肝VX2腫瘤模型監(jiān)測中的應用價值。 結果：采用瘤塊移植法成功建立起穩(wěn)定的兔肝VX2腫瘤模型，成瘤率為93.33％；超聲能準確測量腫

7、瘤的大小，能實時、準確地監(jiān)測肝內腫瘤的回聲變化及腫瘤血管的分布情況；腫瘤的聲學造影特點為典型的“快進快出”。 結論：瘤塊移植法是一種操作簡單、成瘤率高的建立兔肝VX2腫瘤模型的方法；超聲檢查能準確、方便、無創(chuàng)地監(jiān)測兔肝VX2腫瘤的生長；超聲檢查為利用該模型評價治療肝癌的新技術的療效提供了有效的監(jiān)測方法。 第二節(jié)超聲定位輻照載血卟啉微泡治療兔肝VX2腫瘤的實驗研究 目的：研究超聲定位輻照載血卟啉微泡介導藥物靶向釋放

8、技術對兔VX2肝移植瘤的治療效果。 方法：35只新西蘭大白兔，于肝左葉內植入VX2腫瘤組織塊，建立肝移植瘤模型。實驗動物隨機分成7組，每組5只，包括①超聲定位輻照載血卟啉微泡組（US+LMLH）、②超聲定位輻照血卟啉組（US+HP）、③超聲定位輻照空白脂質微泡組（US+MB）、④單純載血卟啉微泡組（LMLH）、⑤單純血卟啉組（HP）、⑥單純超聲輻照組（US）和⑦生理鹽水對照組（C）。治療前后用2DUS、CDFI及CEUS觀察腫瘤

9、的大小、回聲及血流灌注情況，計算腫瘤體積大小及生長抑制率；同時觀察不同處理組肝內轉移及遠處轉移情況；并用透射電鏡觀察腫瘤細胞的超微結構，免疫組化法檢測腫瘤組織CD34及PCNA的表達，TUNEL試劑盒檢測腫瘤細胞的凋亡情況。 結果：US+LMLH組腫瘤內部呈混合回聲，CDFI及CEUS顯示腫瘤的滋養(yǎng)血管明顯減少，生長抑制率高于其他各組；在肝內及遠處轉移方面，US+LMLH組明顯優(yōu)于其他各組；超微結構顯示US+LMLH組細胞膜破壞