黃芪三萜類物質(zhì)對心肌細胞的保護作用及細胞凋亡調(diào)控基因表達的影響.pdf

1、目的 篩選針對病毒性心肌炎(VMC)細胞模型有效的天然藥物成分黃芪三萜類物質(zhì)(Total Extract of Astragalus，TEA)，觀察研究其在VMC外細胞培養(yǎng)模型中的心肌細胞保護作用的機制，以及對細胞凋亡調(diào)控基因的影響。 方法 建立病毒性心肌炎細胞模型，觀察TEA對柯薩奇病毒B組3型(CVB3)病毒感染后的Veto細胞是否有保護作用；采用差速貼壁法培養(yǎng)原代乳鼠心肌細胞，鏡下觀察心肌細胞搏動次數(shù)，使用

2、HE染色和a-actin免疫組化法鑒定培養(yǎng)心肌細胞的純度。以CVB3病毒感染心肌細胞后，進行細胞病變(CPE)抑制試驗：CVB3病毒感染乳鼠原代心肌細胞后，于不同時間加入TEA和病毒，逐日觀察心肌細胞搏動次數(shù)、細胞病變，MTT染色以比較各組間活細胞數(shù)的差別；病毒繁殖抑制實驗比較不同分組間TCID50的差別以驗證TEA的抗病毒活性。實驗以鹽酸胍作為陽性對照藥。應(yīng)用流式細胞計量術(shù)、DNA Ladder分析凋亡發(fā)生的情況，RT-PCR測定C-

3、myc表達變化。 結(jié)果 TEA在體外實驗中(CPE抑制實驗)能有效抑制CVB3引起的在Vero細胞及心肌細胞病變(P<0.01)。病毒繁殖抑制實驗的結(jié)果為：加藥組比病毒對照組TCID50降低兩個以上對數(shù)值，其藥效優(yōu)于同等濃度的抗病毒陽性對照藥物——鹽酸胍。流式細胞儀和姬姆薩染色能夠觀察到CVB3感染心肌細胞后存在凋亡，并顯示加藥組凋亡細胞比率要小于病毒對照組，但沒有觀察到明顯的DNA Ladder。RT-PCR結(jié)果提示T