冷凍消融對(duì)肝癌小鼠免疫功能影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：探討小鼠皮下移植型肝癌經(jīng)冷凍處理后，機(jī)體免疫功能變化情況，為臨床冷凍免疫的應(yīng)用提供免疫學(xué)依據(jù)。 方法：取Balb/c小鼠72只，隨機(jī)分三組，A、B、C三組均制成H22皮下移植瘤模型，分別行氬氦冷凍治療(實(shí)驗(yàn)組A，n=24)，氬氦冷凍治療1天后輔以弗氏佐劑(實(shí)驗(yàn)組B，n=24)，荷瘤對(duì)照(對(duì)照組C，n=24)。觀察小鼠皮下腫瘤生長(zhǎng)情況。A、B、C三組于冷凍術(shù)前和術(shù)后1周、2周、3周，每組各取6只小鼠，分別采用眼球采血法采集外

2、周血，無菌條件下取小鼠脾臟制成脾淋巴細(xì)胞，采用ELISA法檢測(cè)小鼠外周血IFN-γ、IL-4濃度，LDH法檢測(cè)小鼠脾淋巴細(xì)胞殺傷活性。 結(jié)果：接種后5天小鼠右側(cè)腹股溝處可以捫及腫瘤長(zhǎng)出。接種后2周，局部可形成一直徑0.8-1.0cm的腫塊，72只Balb/c小鼠全部接種成功。對(duì)照組隨腫瘤種植時(shí)間的延長(zhǎng)，IFN-γ呈逐漸下降趨勢(shì)，IL-4呈逐漸升高趨勢(shì)，于對(duì)照處理后2、3周IL-4濃度顯著高于處理前(P<0.05)；對(duì)照處理后3周

3、IFN-γ濃度顯著低于處理前(P<0.05)，發(fā)生了由Th1向Th2的漂移。實(shí)驗(yàn)組A和實(shí)驗(yàn)組BIL-4均呈逐漸降低趨勢(shì)，而IFN-γ均呈逐漸升高趨勢(shì)。實(shí)驗(yàn)組A治療后IL-4逐漸降低趨勢(shì)，治療后1、2、3周均顯著低于治療前和同期對(duì)照組(P<0.05)；而IFN-γ逐漸升高，治療后1、2、3周均顯著高于對(duì)照組(P<0.05)，但與治療前比較無顯著性差異(P>0.05)。實(shí)驗(yàn)組B治療后IL-4呈逐漸降低趨勢(shì)，治療后1、2、3周均顯著低于治療前

4、和同期對(duì)照組(P<0.05)；而IFN-γ逐漸升高，治療后1、2、3周均顯著高于治療前和對(duì)照組(P<0.05)，但治療后3周與2周比較無顯著性差異。實(shí)驗(yàn)組A與實(shí)驗(yàn)組B比較，實(shí)驗(yàn)組BIL-4低于實(shí)驗(yàn)組A，IFN-γ高于實(shí)驗(yàn)組A，于治療后3周時(shí)有顯著性差異(P<0.05)。各組脾淋巴細(xì)胞殺傷活性處理后1周時(shí)顯著增加，治療后2、3周呈下降趨勢(shì)，各組間變化趨勢(shì)相同。對(duì)照組，對(duì)照處理后3周顯著低于處理前、處理后1周、2周(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組A

5、，治療后1周、2周脾淋巴細(xì)胞殺傷活性均顯著高于同期對(duì)照組及治療前(P<0.05)。實(shí)驗(yàn)組B，治療后1、2周脾淋巴細(xì)胞殺傷活性增強(qiáng)，顯著高于同期實(shí)驗(yàn)組A和對(duì)照組(P<0.05)。 結(jié)論：荷H22肝癌小鼠隨腫瘤種植時(shí)間延長(zhǎng)，機(jī)體IFN-γ逐漸降低趨勢(shì)，IL-4逐漸升高趨勢(shì)，Th1/Th2逐漸降低，發(fā)生Th1向Th2漂移；脾淋巴細(xì)胞殺傷活性逐漸減弱，機(jī)體抗腫瘤免疫功能逐漸降低。冷凍治療可使荷瘤小鼠外周血IFN-γ輕度升高，IL-4顯著