脂溢性皮炎患者和健康志愿者面部馬拉色菌菌種差異分析.pdf

1、背景：馬拉色菌是一種嗜脂酵母，是人類正常常駐菌，為了研究馬拉色菌與馬拉色菌毛囊炎、脂溢性皮炎、特異性皮炎等疾病的發(fā)病關(guān)系，因此快速準(zhǔn)確的鑒定馬拉色菌菌種顯得尤為重要。
　　目的：1）比較表型鑒定方法和序列測(cè)定分析方法的差別。2）以本地區(qū)脂溢性皮炎患者的臨床株為研究對(duì)象，以健康志愿者菌株為對(duì)照組，在首先獲得每個(gè)菌株ITS區(qū)堿基序列后，采用分子系統(tǒng)學(xué)軟件對(duì)基因片段序列進(jìn)行分析，將菌株鑒定到種，結(jié)合這些菌株的形態(tài)學(xué)特征、生理生化鑒定結(jié)果

2、，確定馬拉色菌菌種分類，從而揭示本地區(qū)脂溢性皮炎（Seborrheic Dermatitis，SD）患者及健康志愿者面部馬拉色菌菌種差異。
　　方法：本研究對(duì)124株臨床分離株分別進(jìn)行形態(tài)學(xué)、生化試驗(yàn)、DNA序列分析等方法的試驗(yàn)，通過(guò)表型鑒定方法與分子生物學(xué)鑒定方法相互驗(yàn)證來(lái)更可靠的對(duì)所得臨床株分類。本研究所用到的形態(tài)學(xué)方法主要包括直接鏡檢、觀察培養(yǎng)菌落形態(tài)、培養(yǎng)后菌株鏡檢，生化試驗(yàn)方法主要采用沙氏培養(yǎng)基生長(zhǎng)試驗(yàn)、吐溫試驗(yàn)、七葉苷

3、分解試驗(yàn)、過(guò)氧化氫試驗(yàn)等傳統(tǒng)試驗(yàn)方法，同時(shí)應(yīng)用分子生物學(xué)方法中的DN A序列分析法來(lái)對(duì)臨床收集到的菌株進(jìn)行鑒定。本研究采用玻璃珠破壁、酚-氯仿-異戊醇抽提法提取基因組DNA，并應(yīng)用真菌通用引物ITS4、ITS5選擇性PCR擴(kuò)增真菌基因組核糖體DNA（rDNA）的 ITS1-5.8S-ITS2區(qū)，并對(duì)該區(qū)進(jìn)行測(cè)序，應(yīng)用DNAMAN、Bioedit軟件對(duì)測(cè)序所得DNA堿基序列進(jìn)行編輯，與Genbank數(shù)據(jù)庫(kù)中的序列比對(duì)，以此鑒定馬拉色菌菌種

4、。應(yīng)用統(tǒng)計(jì)軟件SPSS ll.5分析兩種疾病的菌種構(gòu)成，顯著性檢驗(yàn)水平為α=0.05。
　　結(jié)果：DNA測(cè)序鑒定結(jié)果與表型鑒定結(jié)果存在一定差異，有89.52％（111/124）的菌株兩方法的鑒定結(jié)果是一致的。以測(cè)序鑒定結(jié)果為準(zhǔn)，脂溢性皮炎患者面部菌株糠秕馬拉色菌49株占76.56%，隨后是合軸馬拉色菌8株占12.5%，M.japonica6株占9.38%，球形馬拉色菌1株占1.56%；健康志愿者面部菌株糠秕馬拉色菌37株占61.6