來(lái)氟米特和地塞米松對(duì)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血Th17細(xì)胞的影響.pdf

1、目的:
　　 本研究通過(guò)檢測(cè)類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎(RA)患者外周血中Th17細(xì)胞的表達(dá)水平并且探討Th17細(xì)胞在RA發(fā)病機(jī)制過(guò)程中的作用。在此基礎(chǔ)上,進(jìn)一步觀察治療RA的兩種常用藥物來(lái)氟米特和地塞米松對(duì)RA患者外周血Th17細(xì)胞的影響,以及探討這兩種藥物是否通過(guò)影響Th17細(xì)胞治療RA。
　　 方法:
　　 肝素抗凝管收集己確診的RA患者外周靜脈全血,利用Ficoll密度梯度法分離出單個(gè)核細(xì)胞(PBMCs),采用免疫磁珠

2、法陰選出CD4+T輔助細(xì)胞(Th)。(1)利用細(xì)胞內(nèi)熒光染色的方法標(biāo)記CD4+T細(xì)胞中Th17細(xì)胞的特異細(xì)胞因子IL-17,流式細(xì)胞術(shù)(FCM)測(cè)定Th17細(xì)胞占整個(gè)Th的比率;利用實(shí)時(shí)熒光定量逆轉(zhuǎn)錄聚合酶鏈技術(shù)(RT-PCR)測(cè)定Th17細(xì)胞IL-17以及特異性轉(zhuǎn)錄因子ROR-γt的mRNA表達(dá)水平。(2)將分離到的CD4+T輔助細(xì)胞分別與不同劑量的來(lái)氟米特活性代謝產(chǎn)物A771726(15、30、60μg/ml)和地塞米松(10-6、

3、10-7、10-8mol/L)共培養(yǎng)24小時(shí),FCM檢測(cè)藥物干預(yù)過(guò)的RA患者外周血Th17/Th百分率;同時(shí)應(yīng)用RT-PCR技術(shù)檢測(cè)IL-17、ROR-γtmRNA表達(dá)水平。
　　 結(jié)果:
　　 與健康對(duì)照組相比,RA患者組外者血中的Th17細(xì)胞顯著增高。并且體外實(shí)驗(yàn)也表明,A771726對(duì)RA患者外周血Th17細(xì)胞無(wú)抑制作用,對(duì)IL-17、RORγtmRNA表達(dá)水平也無(wú)明顯抑制作用;而地塞米松可以使Th17細(xì)胞和IL-

4、17、RORrtmRNA水平明顯減少,并且隨著作用藥物濃度的增加這種抑制作用更加明顯。來(lái)氟米特對(duì)Th17細(xì)胞在CD4+T細(xì)胞中的百分比無(wú)明顯影響,而地塞米松可以降低Th17細(xì)胞百分比。
　　 結(jié)論:
　　 和健康人相比,類風(fēng)濕關(guān)節(jié)炎外周血Th17細(xì)胞異常增高,表明Thl7細(xì)胞及與其相關(guān)的細(xì)胞因子可能參與了RA患者疾病發(fā)生發(fā)展過(guò)程。治療RA的臨床常用藥物來(lái)氟米特可能對(duì)RA患者外周血Th17細(xì)胞百分比并無(wú)影響,表明其并非通過(guò)