凍融人卵巢組織體外培養(yǎng)和移植的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：1.通過比較不同培養(yǎng)方法對凍融人卵巢組織內(nèi)卵泡生長發(fā)育的影響,以期尋求更好的培養(yǎng)方法。2.探討凍融人卵巢組織異種移植后組織存活及卵泡生長發(fā)育的情況,尋求能夠減少移植物缺血損傷的方法。
　　方法：2012年1～4月取15例安徽醫(yī)科大學(xué)第一附屬醫(yī)院婦產(chǎn)科卵巢成熟性畸胎瘤患者的卵巢組織,采用玻璃化冷凍技術(shù)保存,復(fù)蘇后用不同的組織培養(yǎng)方法進(jìn)行體外培養(yǎng),根據(jù)培養(yǎng)方法的不同將培養(yǎng)分3組:凍融的人卵巢組織單獨(dú)培養(yǎng)組(A組);凍融的人卵巢組

2、織與人早孕蛻膜單層細(xì)胞共培養(yǎng)組(B組);Matrigel培養(yǎng)基培養(yǎng)的凍融的人卵巢組織組(C組)。培養(yǎng)14d后,各培養(yǎng)組取部分組織固定并檢測各組卵巢組織中總體卵泡存活率(TFSR)及生長卵泡率(GFR),B組和C組取另部分組織移植到裸鼠皮下。根據(jù)移植卵巢組織的不同將移植組分為3組(每組裸鼠4只,移植卵巢組織8塊):凍融人卵巢組織直接移植(O組)作為對照組;凍融人卵巢組織與人早孕蛻膜單層細(xì)胞共培養(yǎng)后移植(B1組);凍融人卵巢組織與Matri

3、ge培養(yǎng)基培養(yǎng)后移植(C1組)。移植術(shù)后1個(gè)月取出的移植物,行組織學(xué)檢查。
　　結(jié)果：1.與B、C組比較,A組TFSR和GFR均降低,差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P<0.05);B組和C組比較TFSR和GFR無明顯變化,差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義。2.與O組相比B1、C1組移植卵巢組織回收率和存活率無明顯變化,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05),且回收卵巢組織內(nèi)卵泡GFR無明顯變化,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05);B1和C1組比較移植卵巢組織回收

4、率、存活率及組織內(nèi)卵泡GFR無明顯變化,差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P>0.05)。
　　結(jié)論：1.凍融卵巢組織中的原始卵泡在不同體外培養(yǎng)體系中有不同程度的生長;凍融卵巢組織與人早孕蛻膜細(xì)胞共培養(yǎng)或Matrigel培養(yǎng)基培養(yǎng)相對于單獨(dú)培養(yǎng)更有利于卵泡存活和生長,但這兩種培養(yǎng)方法之間沒有明顯差別,因而我們可以考慮應(yīng)用人早孕蛻膜單層細(xì)胞替代Matrige做培養(yǎng)基達(dá)到避免動物源性污染的目的,但廣泛應(yīng)用仍需要大樣本的實(shí)驗(yàn)研究。2.導(dǎo)致各組移植結(jié)局

5、均不好的原因可能有:1)取材不佳,畸胎瘤患者的卵巢皮質(zhì)內(nèi)卵泡密度畢竟低于正常卵巢皮質(zhì)內(nèi)卵泡密度;2)對卵巢組織活力評估方法有限,被檢測卵巢組織切片并不能完全代表移植的組織情況;3)移植位置不佳,盡管裸鼠皮下可以為移植物提供足夠的生長空間,但裸鼠皮下血管沒有肌肉內(nèi)豐富,這也可能導(dǎo)致移植后血管重建減慢。基于以上所分析的因素,以后實(shí)驗(yàn)可以通過改變前述各種可能的不利于因素,以期改善移植卵巢組織存活和生長發(fā)育情況,提供更多的數(shù)據(jù)的來進(jìn)一步闡明體外