胰腺星狀細胞(PSCs)激活過程中類上皮-間質轉化(EMT)機制研究.pdf

1、背景：胰腺導管腺癌(PDAC)和慢性胰腺炎(CP)以間質中大量纖維結締組織增生為其組織學特點，激活的胰腺星狀細胞(Pancreatic stellate cells，PSCs)則是參與間質纖維化的主要細胞成分。然而，PSCs激活的機制現(xiàn)仍不明確。根據(jù)其激活的特點，我們提出假設，PSCs活化的核心事件是上皮-間質轉化(EMT)。
　　目的：通過檢測PSCs激活前后的細胞功能、形態(tài)、基因表達方面的變化，闡明PSCs活化過程中是否存在類

2、似EMT的過程，并探索其可能的分子機制。
　　方法：通過酶消化-密度梯度離心法從Sprague-Dawley大鼠體內提取正常靜止態(tài)PSCs，原代分離的PSCs均經過免疫熒光染色和免疫化學染色鑒定。本研究將原代分離后培養(yǎng)40h的細胞作為靜止態(tài)PSCs，分離后10d的細胞作為激活態(tài)PSCs，分別對兩組細胞進行Transwell遷移實驗和活細胞工作站檢測，來評估細胞功能改變。并通過qRT-PCR和Western blotting分別檢測

3、兩組細胞的EMT相關基因mRNA和蛋白水平表達變化。
　　結果：每1g大鼠胰腺組織，能夠獲得的PSCs約為:4×106-7×106個，經臺酚藍染色實驗鑒定細胞存活率約為90％左右。原代分離48h內的PSCs定義為靜止態(tài)PSCs，細胞體積小，外觀呈圓形或多邊形，胞內含有豐富的脂滴，可在320nm波長的激發(fā)光下有短暫的自發(fā)藍綠色熒光;超過48h，細胞逐漸激活，外形呈多觸角狀，胞內脂滴逐漸減少直至消失。與靜止態(tài)PSCs相比，激活態(tài)PSC

4、s細胞遷移和運動能力增強。同時，上皮標記（如E-cadherin、BMP7和Desmoplakin）表達下降，伴隨間質標記（如N-cadherin、Vimentin、Fibronectin1、Collagen1α1和S100A4）表達上升，且EMT相關轉錄因子Snail與Slug也有不同程度的上調。
　　結論：細胞遷移和運動能力增強伴隨EMT相關基因表達改變，表明體外靜止態(tài)的大鼠PSCs活化為激活態(tài)的肌成纖維細胞樣PSCs這一過程