血管緊張素II誘導(dǎo)bFGF-mRNA在人肝癌細(xì)胞中的表達(dá).pdf

1、目的:(1)探討血管緊張素Ⅱ(AngⅡ)對(duì)人肝癌HepG2細(xì)胞系中堿性成纖維生長(zhǎng)因子(bFGF) mRNA表達(dá)的作用。(2)比較CCK-8法與BrdU-ELISA法檢測(cè)人肝癌HepG2細(xì)胞增殖的可靠性。
　　方法:(1)離體培養(yǎng)人肝癌HepG2細(xì)胞，采取不同濃度的AngⅡ?qū)?xì)胞進(jìn)行相應(yīng)藥物處理后收集不同作用時(shí)間的細(xì)胞進(jìn)行檢測(cè)，實(shí)驗(yàn)分組每組設(shè)3個(gè)對(duì)照組，采用酶聯(lián)免疫吸附試驗(yàn)(ELISA)及熒光定量-聚合酶鏈反應(yīng)(RT-PCR)法，分

2、別檢測(cè)AngⅡ處理前后人肝癌HepG2細(xì)胞系中bFGF的表達(dá)情況，同時(shí)采用CCK-8法檢測(cè)AngⅡ?qū)θ烁伟〩epG2細(xì)胞增殖的影響。(2)待細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)融合度分別達(dá)60％及80％時(shí)，以10-7mol/L濃度AngⅡ刺激細(xì)胞增殖，24h后分別用CCK-8法和BrdU-ELISA法，以及免疫熒光染色方法檢測(cè)細(xì)胞增殖情況。
　　結(jié)果:(1) AngⅡ不僅能夠刺激人肝癌HepG2細(xì)胞增殖，同時(shí)還能上調(diào)HepG2細(xì)胞中bFGF mRNA的表

3、達(dá)(P＜0.01)，且藥物作用隨著作用時(shí)間及作用濃度的增加而增強(qiáng)，在當(dāng)AngⅡ濃度為10-7mol/L，作用時(shí)間為48h時(shí)，這種促表達(dá)作用達(dá)到最高峰，且該作用可以被AngⅡ1型受體(AT1R)拮抗劑所拮抗。(2)細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)融合度達(dá)60％時(shí)CCK-8檢測(cè)組和BrdU-ELISA檢測(cè)組與各自的對(duì)照組比較，比值分別為1.30和1.59，檢測(cè)值近似;細(xì)胞貼壁生長(zhǎng)融合度達(dá)80％時(shí)二者分別為1.02和1.40，免疫熒光結(jié)果顯示AngⅡ刺激組的增殖