基于全自動(dòng)管式化學(xué)發(fā)光免疫檢測系統(tǒng)的人血清鐵蛋白定量檢測試劑的研制.pdf

1、缺鐵性貧血（irondeficiencyanemia，IDA）是由于各種不同的原因?qū)е麦w內(nèi)儲(chǔ)存鐵缺乏，影響細(xì)胞血紅素的生成而導(dǎo)致的貧血。缺鐵性貧血是世界范圍內(nèi)最常見的營養(yǎng)缺乏病之一，影響著約10億人口。
　　從缺鐵發(fā)展到缺鐵性貧血是一個(gè)緩慢的過程，一般經(jīng)歷鐵缺乏期（irondeplete，ID）、缺鐵性紅細(xì)胞生成期(irondeficiencyerythropoiesis，IDE)和缺鐵性貧血期。發(fā)生缺鐵和缺鐵性貧血不僅會(huì)影響身體

2、正常的機(jī)能，還可能導(dǎo)致胎兒和兒童的智力發(fā)育受到不可逆轉(zhuǎn)的影響。通常機(jī)體內(nèi)儲(chǔ)存鐵的量與血清鐵蛋白的水平成正相關(guān)，機(jī)體內(nèi)血清鐵蛋白的水平是評(píng)價(jià)機(jī)體儲(chǔ)存鐵缺乏和診斷缺鐵性貧血靈敏、特異的指標(biāo)。血清鐵蛋白的檢測對(duì)盡早地發(fā)現(xiàn)缺鐵并預(yù)防缺鐵性貧血的發(fā)生具有重要意義。本研究制備了人鐵蛋白抗原和抗人鐵蛋白抗體，進(jìn)而建立了適用于全自動(dòng)管式化學(xué)發(fā)光免疫分析系統(tǒng)的人血清鐵蛋白化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑，試劑檢測性能與國際主流同類試劑相當(dāng)。
　　本研究利用

3、大腸桿菌表達(dá)系統(tǒng)表達(dá)了人鐵蛋白H、L亞基(FTH1，F(xiàn)TL)，所表達(dá)的蛋白經(jīng)熱處理、凝膠過濾層析、陰離子交換層析等方法純化，獲得了純度較高的rhFTH1和rhFTL。經(jīng)過SDS-PAGE、分子篩層析和透射電鏡觀察等方法證實(shí)了純化的rhFTH1、rhFTL能在體外自組裝成與天然鐵蛋白類似的二十四聚體樣結(jié)構(gòu)顆粒。
　　用原核表達(dá)的人鐵蛋白H、L亞基形成的顆?？乖庖咝∈螅@示rhFTL具有較好的免疫原性;以rhFTL和天然提取的人肝臟

4、鐵蛋白為篩選抗原進(jìn)行單克隆抗體的篩選，最終獲得了22株鐵蛋白特異性的單克隆抗體。鑒定了其中16株IgG亞型的單克隆抗體的基本性質(zhì)，其中有12株抗體的效價(jià)達(dá)106以上。
　　對(duì)研究中篩選到的12株反應(yīng)性較好的單克隆抗體進(jìn)行抗體配對(duì)，以鐵蛋白標(biāo)準(zhǔn)品進(jìn)行配對(duì)初篩、臨床標(biāo)本進(jìn)行配對(duì)復(fù)篩獲得了2個(gè)可用的抗體配對(duì)。根據(jù)配對(duì)抗體建立人血清鐵蛋白化學(xué)發(fā)光免疫定量檢測試劑，分析其檢測靈敏度、線性范圍及與對(duì)照試劑檢測血清標(biāo)本的相關(guān)性，結(jié)果顯示建立的人