攜抗基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗體脂質(zhì)微泡在評價(jià)兔睪丸不同程度缺血再灌注損傷中的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：比較不同程度缺血及不同復(fù)灌注時(shí)間引起的睪丸微血管的損傷改變，研究攜抗基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗體脂質(zhì)微泡（TMB-9）在兔睪丸不同程度缺血再灌注損傷中的評價(jià)，尋求一種更能客觀、直接評價(jià)睪丸微血管損傷的無創(chuàng)方法。
　　方法：制備普通脂質(zhì)微泡（MB）及攜抗基質(zhì)金屬蛋白酶-9抗體脂質(zhì)微泡（TMB-9）并檢測其相關(guān)聲學(xué)特性。
　　將54只成年健康大白兔隨機(jī)分成對照組（S組）、輕度缺血復(fù)灌注組（R1、R2、R3、R4組），中度缺血復(fù)灌

2、注組（R1'、R2'、R3'、R4'組）共9組，每組6只。隨機(jī)選擇一側(cè)睪丸，于睪丸上方2cm處完全結(jié)扎精索建立睪丸缺血模型，肉眼可見陰囊壁變黑，彩超監(jiān)測下示睪丸血流量完全消失，其中R1、R2、R3、R4組分別缺血2h后，復(fù)灌注2h、6h、12h、24h，建立睪丸微血管輕度缺血不同復(fù)灌注程度模型；R1'、R2'、R3'、R4'組分別缺血4h后，復(fù)灌注2h、6h、12h、24h，建立睪丸微血管中度缺血不同復(fù)灌注程度模型。S組暴露精索后穿線但

3、不結(jié)扎。
　　術(shù)前、術(shù)后每組分別進(jìn)行雙側(cè)睪丸MB及TMB-9超聲造影，運(yùn)用超聲造影量化分析技術(shù)分析各組造影參數(shù)：峰值強(qiáng)度（PI）、達(dá)峰時(shí)間（TP）、曲率（Slope）、平均渡越時(shí)間（MTT）、峰值減半時(shí)間（DT/2）和曲線下面積（Area）的變化以及兩種脂質(zhì)微泡之間的區(qū)別。各組術(shù)前及造影結(jié)束后，在彩超引導(dǎo)下經(jīng)心臟穿刺取血3ml，實(shí)驗(yàn)室檢測血漿血管性血友病因子（vWF）、一氧化氮（NO）、內(nèi)皮素-1（ET-1）含量。術(shù)后取術(shù)側(cè)睪丸，

4、多點(diǎn)取材，行HE染色及免疫組織化學(xué)染色檢查（基質(zhì)金屬蛋白酶MMP-9），對比觀察各組病理變化以及組間區(qū)別。使用SPSS13.0軟件進(jìn)行統(tǒng)計(jì)學(xué)分析，所有數(shù)據(jù)均以x±s表示，兩組數(shù)據(jù)間的比較采用兩獨(dú)立樣本t檢驗(yàn)。差異性檢驗(yàn)水準(zhǔn)設(shè)為P<0.05（雙側(cè)）。
　　結(jié)果：脂質(zhì)微泡造影劑為乳狀白色稠狀液體，光鏡下可見粒徑約為3-5μm，分布較均一的圓形微泡，室溫下靜置30min后，可出現(xiàn)分層，微泡變大、數(shù)量減少，24h后液體變澄清，幾乎未見明顯

5、微泡。
　　術(shù)前各實(shí)驗(yàn)組、對照組間術(shù)側(cè)睪丸超聲造影（MB組及TMB9組）各參數(shù)無明顯差別（P>0.05）。輕度缺血組，TMB9組中，R1組較S組患側(cè)PI、Slope、Area明顯增加（P<0．01），MTT、DT/2明顯延長（P<0．01），TP明顯縮短（P<0．01）。隨著復(fù)灌注時(shí)間延長，PI、Slope、Area逐漸降低（P<0．05），TP、MTT、DT/2逐漸增加（P<0．05）。TMB9組較MB組PI、MTT增加（P<0

6、．05），DT/2、Slope、Area顯著增加，TP明顯降低（P<0．01）。
　　中度缺血組，TMB9組中，R1'組較S組PI、Slope、Area明顯增加（P<0.01），DT/2延長(P<0．05)，TP減少（P<0.01）。隨著復(fù)灌注時(shí)間進(jìn)一步延長，PI、Slope明顯降低（P<0.01）、Area減少（P<0．05），TP、DT/2、MTT明顯延長（P<0.01）。TMB9組較MB組PI顯著增加，Slope、DT/2、

7、MTT、Area顯著增加，TP明顯降低(P<0．01)。
　　術(shù)前各組間血漿vWF、NO、ET-1含量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P>0.05）。術(shù)后各實(shí)驗(yàn)組血漿vWF、NO、ET-1含量均較S組顯著增高（P<0.01）。在輕度缺血復(fù)位早期（R1及R2組），vWF、NO、ET-1逐漸升高，R3組中ET-1含量最高。中度缺血組中，隨著復(fù)灌注時(shí)間延長，ET-1，NO水平逐漸升高（P<0.05）。
　　睪丸病理檢查結(jié)果：S組睪丸間質(zhì)微血管未見