小鼠核因子κB受體活化因子配基（RANKL）胞外段cDNA在大腸桿菌中的表達.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、目的：克隆小鼠核因子-κB受體活化因子配基(receptoractivatorofnuclearfactorκBligand，RANKL)胞外段cDNA并在大腸桿菌中表達純化。分析重組蛋白的生物活性。 方法：從小鼠脾組織中分離總RNA，采用RT-PCR方法獲得小鼠cDNA，以其為模板，利用PCR方法分兩步擴增出RANKL胞外段基因編碼序列，克隆入pGEM(R)-TEasy載體，并進行DNA序列分析。然后將目的片段插入融合型原核表

2、達載體pGEX-2T中，重組表達質粒pGEX-2T/RANKL轉化入大腸桿菌BL21中誘導表達，聚丙烯酰胺凝膠電泳鑒定可見大約40KD蛋白條帶。經優(yōu)化表達條件后，Westernblotting進一步鑒定該融合蛋白。目的蛋白含GST純化標簽，利用GlutathioneSepharose4B親和層析純化。采用體外破骨細胞樣細胞誘導分化實驗分析重組蛋白生物活性。 結果：獲得了小鼠RANKL胞外段cDNA，并成功構建了高效原核表達質粒p

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