一種新型的“重力自平衡——自由流電泳儀”的研制及其應(yīng)用研究.pdf

1、自由流電泳（Free Flow Electrophoresis，F(xiàn)FE）是一種全液相制備型生物分離技術(shù)，已經(jīng)被用以分離諸如蛋白質(zhì)、DNA、臨床藥物、細(xì)胞等物質(zhì)?，F(xiàn)有的自由流電泳儀一般通過(guò)恒流多道泵將緩沖溶液輸入到分離室中，同時(shí)橫向施加電場(chǎng)以達(dá)到分離的目的。 由于沒(méi)有任何固體介質(zhì)，所用的大多又是水相，因此對(duì)于自由流電泳來(lái)說(shuō)，首先樣品的回收率幾乎達(dá)到100％，其次適應(yīng)性很好的溫和的水相環(huán)境使得酶或者細(xì)胞在純化過(guò)程中保留了其生物活性，

2、再次整個(gè)電泳是一個(gè)連續(xù)的過(guò)程，因此自由流電泳可以用于制備，其通量甚至要高于制備型色譜技術(shù)。 但現(xiàn)有制備型電泳儀存在以下問(wèn)題：第一，商業(yè)用電泳儀中控制均等流速的48道或者96道的多道泵價(jià)格非常昂貴。第二，由于進(jìn)樣方式（基本都是單管進(jìn)樣）和分離室的限制一般很少用于樣品富集，現(xiàn)有儀器處理樣品的通量也不會(huì)很高。 本論文的第一個(gè)內(nèi)容就是介紹一種嶄新的自由流電泳儀，該儀器采用氣液緩沖分流裝置作為進(jìn)樣器，聯(lián)用自平衡收集系統(tǒng)，以代替價(jià)格

3、昂貴的多道泵。其中，氣液緩沖分流器、電泳分離室和自平衡收集系統(tǒng)將會(huì)被詳細(xì)地介紹。隨后，通過(guò)系統(tǒng)性的實(shí)驗(yàn)，整套儀器的性能被全面地評(píng)估。通過(guò)線性流體實(shí)驗(yàn)可以看到分離室中的各泳道液流速度保持一致，液流環(huán)境穩(wěn)定；通過(guò)Ω曲線實(shí)驗(yàn)可以評(píng)估焦耳熱消散程度以及電極性能。為了證明儀器本身的實(shí)驗(yàn)可行性，我們進(jìn)行了區(qū)帶自由流電泳模式分離三種氨基酸的實(shí)驗(yàn)，在實(shí)驗(yàn)中三種氨基酸（組氨酸、色氨酸和脯氨酸）被完全分開，遷移距離同理論值相符，同時(shí)還評(píng)估了進(jìn)樣方式的差異。

4、 本論文的第二個(gè)內(nèi)容就是介紹移動(dòng)反應(yīng)界面（MRB）在自由流電泳中的研究及其應(yīng)用。研究中我們首先將Cu2＋和EDTA作為兩相，選用了移動(dòng)螯合界面MCB來(lái)觀測(cè)界面在整個(gè)分離室中遷移全過(guò)程，用來(lái)證明移動(dòng)反應(yīng)界面在自由流電泳中的存在。其次，我們利用移動(dòng)中和界面技術(shù)（MNB）對(duì)組氨酸進(jìn)行了富集，富集倍數(shù)高達(dá)10倍以上，同時(shí)由于采用堿相全管上樣方式，樣品的通量高達(dá)4090mL/day。在富集過(guò)程中，我們通過(guò)保持其他因素不變改變緩沖液的流速的