納米修飾DNA電化學(xué)傳感器及其對(duì)轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)品特定序列的檢測(cè).pdf

1、以水熱法合成十六烷基三甲基溴化銨(CTAB)修飾的PbSe納米粒子。在碳糊電極表面制備的PbSe納米粒子殼聚糖(CHIT)復(fù)合膜上，實(shí)現(xiàn)了DNA的固定和雜交，并用循環(huán)伏安法和電化學(xué)交流阻抗法進(jìn)行了表征。應(yīng)用電活性分子亞甲紫(MV)作為雜交指示劑以微分脈沖伏安法對(duì)轉(zhuǎn)基因植物CaMV35S啟動(dòng)子基因片段進(jìn)行測(cè)定，定量檢測(cè)范圍為5.0×10-11-5.0×10-6mol/L，檢測(cè)限為1.6×10-11mol/L(3σ)。該傳感器對(duì)DNA互補(bǔ)序

2、列、非互補(bǔ)序列和2堿基錯(cuò)配序列可很好地識(shí)別。 先將碳納米管羧基化，然后將羧基化的碳納米管(CNT)涂層于碳糊電極表面，制備了碳納米管修飾電極。利用乙基-(3-二甲基丙基)碳二亞胺鹽酸鹽(EDC)和N-羥基琥珀酰亞胺(NHS)為活化劑活化羧基，通過(guò)活化的羧基與末端衍生氨基的DNA之間的共價(jià)鍵合作用固定DNA，并以CNT為橋梁將辣根過(guò)氧化物酶(HRP)與探針DNA序列鏈接起來(lái)，形成HRP標(biāo)記的探針DNA序列，雜交后使用電化學(xué)方法測(cè)定標(biāo)

3、記上的HRP的量，從而定量測(cè)定DNA，檢測(cè)限為2.5×10-12mol/L。 將羧基化的碳納米管(CNT)涂層于碳糊電極表面，制備了碳納米管修飾電極，通過(guò)活化的羧基與末端帶有氨基的目標(biāo)DNA形成酰胺鍵以固定DNA，將羧基二茂鐵(FCA)的羧基活化后，同樣利用其與探針DNA氨基之間的作用，將其標(biāo)記于DNA上，雜交后，用電化學(xué)方法測(cè)定標(biāo)記上的FCA的量，從而定量測(cè)定DNA，檢測(cè)限為3-3×10-11mol/L。 轉(zhuǎn)基因植物產(chǎn)

4、品的研究開發(fā)給人們的日常消費(fèi)帶來(lái)了更為廣闊的選擇空間，但其安全性問(wèn)題也引起了人們的關(guān)注。如何對(duì)其進(jìn)行簡(jiǎn)單、高效的檢測(cè)成為研究的熱點(diǎn)。結(jié)合電化學(xué)生物傳感技術(shù)與分子生物學(xué)技術(shù)，可實(shí)現(xiàn)對(duì)轉(zhuǎn)基因植物外源基因序列的測(cè)定。應(yīng)用納米材料可以大大提高檢測(cè)的靈敏度。本論文將納米材料應(yīng)用于DNA電化學(xué)生物傳感器的制備，并對(duì)轉(zhuǎn)基因植物某些外源基因特定序列進(jìn)行了檢測(cè)。其主要工作如下： 利用PbSe納米粒子和碳納米管修飾碳糊電極，分別通過(guò)吸附法和共價(jià)鍵合

5、法將單鏈DNA固定于修飾電極表面，通過(guò)掃描電子顯微鏡及電化學(xué)方法進(jìn)行表征，結(jié)果表明修飾電極能夠有效地固定DNA，且固定在修飾電極上的DNA保持著較好的雜交活性。 分別利用雜交指示劑亞甲紫(MV)、辣根過(guò)氧化物酶(HRP)標(biāo)記和二茂鐵標(biāo)記的方法對(duì)轉(zhuǎn)基因植物外源基因啟動(dòng)子CaMV35S序列片段進(jìn)行雜交檢測(cè)。結(jié)果表明指示劑檢測(cè)法與標(biāo)記檢測(cè)方法對(duì)特定序列的檢測(cè)均有較高的靈敏度和選擇性，可以較好的識(shí)別目標(biāo)序列，及與目標(biāo)序列相關(guān)的兩堿基錯(cuò)配