HSP70對H-,2-O-,2-誘導(dǎo)的乳鼠心肌細(xì)胞凋亡過程中鈣穩(wěn)態(tài)調(diào)控的進一步研究.pdf

1、熱休克蛋白70（Heatshockprotein70，HSP70）屬于細(xì)胞內(nèi)分子伴侶蛋白，除涉及細(xì)胞內(nèi)一些蛋白質(zhì)分子構(gòu)象和穩(wěn)定性的調(diào)節(jié)之外，熱休克蛋白對細(xì)胞應(yīng)激、代謝、增殖以及凋亡等生理過程均具有重要的調(diào)控作用。但是對于HSP70對于ROS引起的心肌細(xì)胞凋亡延遲保護作用目前在分子細(xì)胞機制上仍然不清楚。本實驗以體外培養(yǎng)的乳鼠心肌細(xì)胞為研究對象，用溫度誘導(dǎo)熱休克蛋白（HSP70）來模擬預(yù)適應(yīng)，H2O2建立細(xì)胞的ROS損傷模型，主要從分子和細(xì)

2、胞機制上探討HSP70對于心肌凋亡中鈣離子的調(diào)控作用。實驗中應(yīng)用MTT和流式細(xì)胞技術(shù)檢測細(xì)胞的凋亡，發(fā)現(xiàn)損傷組的存活率明顯低于其他2組，熱休克組（Heatshockgroup，HSgroup）細(xì)胞存活率略低于正常組（CONgroup）細(xì)胞；免疫組化結(jié)果表明只有在HS組才檢測到陽性反應(yīng)，即是HSP70的表達，其他2組均為弱陽性結(jié)果；應(yīng)用離子成像技術(shù)對細(xì)胞內(nèi)鈣離子濃度進行測定，發(fā)現(xiàn)損傷組290．6918+8．922（nM）明顯高于正常組19

3、2．224±6．654（nM）和HS組214．2633±4．484（nM），HS組細(xì)胞內(nèi)的鈣離子濃度略高于正常組；為了進一步探討HSP70對于ROS引起的心肌凋亡過程中鈣離子的調(diào)控機制，又對各組的心肌細(xì)胞進行了鈣瞬變的測定。實驗結(jié)果表明，H2O2單純損傷組的心肌細(xì)胞胞漿內(nèi)的鈣瞬變發(fā)生明顯改變，主要表現(xiàn)為：鈣瞬變時程的明顯延長，鈣瞬變發(fā)生的速率明顯減慢，并且由SR釋放的鈣離子明顯增多（約43．19％），鈣瞬變的消逝速率也明顯延長，進而導(dǎo)致

4、心肌細(xì)胞內(nèi)的鈣超載和心肌細(xì)胞的自發(fā)性收縮減慢：進行HSP70過度表達的HS組鈣瞬變過程對H2O2造成的損傷有明顯的修復(fù)作用，主要表現(xiàn)為：鈣瞬變的時程比損傷組有明顯減少，SR釋放的鈣離子有顯著的降低（約15．93％），鈣瞬變消逝的速率也明顯加快，說明HSP70對SR上相關(guān)的RyR進行了修復(fù)，使得釋放的鈣離子減少，并且對NCX進行了修復(fù)使得鈣的跨膜轉(zhuǎn)運加快，從而對心肌細(xì)胞的收縮起到一定的保護作用，但是對于H2O2造成的鈣調(diào)控位點的損傷并不能