DAHP下調(diào)NOS通路和TP上調(diào)PI3K-Akt通路的抗炎抗凋亡作用對腦缺血的神經(jīng)保護機制研究.pdf

1、第一部分 DAHP下調(diào)MCAO模型中NOS通路的抗凋亡神經(jīng)保護作用
　　目的: BH4，作為NOS的輔因子，參與調(diào)節(jié)NO的合成，且GTPCH-Ⅰ為BH4體內(nèi)從頭合成的關鍵限速酶。本實驗使用DAHP，GTPCH-1的抑制劑，通過來抑制BH4從頭合成來下調(diào)NOS和NO的產(chǎn)生，進而研究DAHP對缺血性中風的神經(jīng)保護機制。
　　方法: DAHP預保護12h，術后24h麻醉大鼠取腦，運用核磁共振成像(MRI)技術、TTC染色、TUNE

2、L試驗、免疫組化、免疫熒光、western blot和RT-PCR技術，檢測抗凋亡關鍵蛋白和抗炎因子表達，以及評估損傷后腦梗死與水腫范圍。結果:作為BH4從頭合成關鍵酶GTPCH-Ⅰ的抑制劑，DAHP可有效下調(diào)MCAO/R后損傷區(qū)GTPCH-Ⅰ，iNOS和nNOS的表達，但BH4不涉及損傷后早期eNOS合成。與MCAO損傷組相比，DAHP治療能減少腦梗死和水腫范圍的。TUNEL數(shù)據(jù)以及凋亡相關關鍵蛋白表達量，說明DAHP有抗凋亡的作用;

3、同時，免疫組化和Western Blot數(shù)據(jù)均反映TP有下調(diào)NF-kB/COX-2/iNOS抗炎作用。
　　結論:本實驗中，DAHP可以通過稀釋iNOS和nNOS由MCAO/R損傷引起的表達上調(diào)，并可能通過下調(diào)NF-kB/COX-2/iNOS炎癥相關通路，來實現(xiàn)其抗凋亡的神經(jīng)保護作用。
　　第二部分 TP通過PI3K/Akt介導體內(nèi)外腦缺血缺氧再灌注模型的抗炎神經(jīng)保護作用
　　目的:探討雷公藤甲素(TP)對大鼠局灶性腦

4、缺血再灌注模型和離體PC12細胞的在缺氧條件下的抗炎保護作用
　　方法:在體實驗，30只SD大鼠分為三組:假手術組、MCAO損傷組、MCAO+TP治療組。 TP12h預保護，大鼠腦缺血1.5h再灌注24h后，利用MRI技術和TTC染色測定腦梗死的位置和范圍，同時參照Longa神經(jīng)功能評分法，進行行為學檢測。另外，通過TUNEL試驗、免疫組化、免疫熒光、Western Blot和RT-PCR技術進行指標檢測。離體實驗，通過MTT篩選

5、合適的TP給藥濃度范圍;不同劑量TP預保護24h，PC12細胞缺氧2h，培養(yǎng)12h后檢測炎癥反應與凋亡壞死情況，研究TP在體外治療的作用機制并篩選最優(yōu)給藥劑量。
　　結果:在體實驗中，與MCAO損傷組相比:TTC染色顯示，TP治療能減少梗死范圍;神經(jīng)癥狀行為學評分顯示，TP治療可以減輕神經(jīng)功能損傷;TUNEL實驗顯示，TP有抗凋亡的作用;同時，免疫組化與熒光、western blot和RT-PCR數(shù)據(jù)均反映TP的抗炎作用;檢測PI

6、3K/AKT通路關鍵蛋白表達pAkt/Akt，發(fā)現(xiàn)TP可明顯上調(diào)MCAO/R損傷后Akt的磷酸化，起到促進存活抗凋亡的神經(jīng)保護作用。離體實驗中，TP治療組有明顯的抗炎抗凋亡壞死作用（與損傷組比較，P＜0.05），且綜合分析0.4ng/ml可以作為日后體外研究的TP的給藥劑量。
　　結論:雷公藤甲素預保護對大鼠MCAO模型有抗炎保護作用，且通過PI3K/AKT通路抗凋亡。同時，其對PC12細胞缺氧模型同樣具有抗凋亡作用，且0.4ng