水牛奶酪蛋白ACE抑制肽制備工藝的研究.pdf

1、本試驗旨在研究水牛奶酪蛋白ACE抑制肽的制備條件,為開拓水牛奶制品的高端市場,增加產(chǎn)品品種,提高產(chǎn)品附加值提供參考。
　　 本試驗采用等電點法從水牛奶中提取酪蛋白,并通過雙縮脲法測定酪蛋白的純度。從胰蛋白酶和胃蛋白酶中篩選出最佳的酶解酪蛋白用酶,并對各影響酶解反應(yīng)的因素:PH值、時間、[E]/[S]、溫度進(jìn)行單因素試驗,在單因素試驗的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗,探討酶解反應(yīng)的最佳工藝條件;然后采用截留分子量為10KDa和3KDa的超濾膜

2、對酶解液進(jìn)行二級超濾,以超濾膜透過量為指標(biāo),考察各因素:操作溫度、酶解液PH值、操作壓力、操作時間對超濾工藝的影響;超濾液采用離子交換層析法和凝膠層析法分離ACE抑制肽,考察進(jìn)樣量、洗脫液濃度、洗脫液流速對分離效果的影響,研究結(jié)果如下:
　　 (1)采用等電點法從新鮮水牛奶中提取酪蛋白,得到酪蛋白占總蛋白比例為78.33％,比較接近理論值80％,同時采用雙縮脲法測定酪蛋白的純度達(dá)到93.37％,可以作為酶解工藝蛋白原料。

3、　　 (2)篩選出胃蛋白為最佳用酶,以ACE活性抑制率為指標(biāo),在單因素試驗的基礎(chǔ)上進(jìn)行正交試驗,確定了酶解工藝的最佳條件:溫度為37℃、時間為3h、[E]/[S]為3％、PH值為2.5。在此條件下酶解酪蛋白,酶解液的ACE活性抑制率為38.30％。
　　 (3)以超濾膜透過量為指標(biāo),使用截留分子量分別為10KDa和3KDa的超濾膜對酶解液進(jìn)行二級超濾,同時研究分析操作溫度、操作壓力、操作時間、酶解液的PH值對超濾膜透過量的影響

4、,結(jié)果表明:
　　 操作溫度為35℃、一級操作壓力為0.08MPa、二級操作壓力為0.10MPa、酶解液的PH值為8.5時,在較短的時間內(nèi)進(jìn)行超濾操作能夠得到最佳的透過量。二級超濾液對ACE活性抑制率達(dá)到46.28％,表明具有抑制ACE活性的成分主要集中在分子量＜3KDa的濾液中
　　 (4)考察各因素對離子交換層析和凝膠層析分離效果的影響,探討較佳的分離純化條件,得到的結(jié)果如下:
　　 (1).在離子交換層析中

5、,柱溫為30℃時的離子交換層析純化ACE抑制肽的優(yōu)化條件為:進(jìn)樣量為10mg、洗脫液濃度為1.0mol·L-1、洗脫液流速0.5mL·min-1。在此條件下,分離組分洗脫峰的ACE活性抑制率達(dá)到55.20％,表明具有能抑制ACE活性的成分主要集中在洗脫峰2中。
　　 (2).在凝膠層析中,在柱溫為30℃時對離子交換層析中的洗脫峰進(jìn)行分離純化的優(yōu)化條件為:洗脫液濃度為0.1mol·L-1、洗脫液流速為0.5mL·min-1。在此條