三種含氮雜環(huán)化合物對麥田土壤細菌的影響及對銅綠假單胞菌基因的調(diào)節(jié).pdf

1、本文的研究目的旨在通過研究供試含氮雜環(huán)化合物對麥田土壤細菌多樣性的影響及對銅綠假單胞菌基因的調(diào)節(jié)作用，從分子生物學(xué)的角度對農(nóng)藥影響環(huán)境中微生物生態(tài)及微生物對農(nóng)藥的降解做出有益的研究和探索，以期能從分子水平上了解、分析農(nóng)藥與微生物的關(guān)系，為新農(nóng)藥的創(chuàng)制提供實驗室條件下進行環(huán)境評測的有效手段。 在前期工作的基礎(chǔ)上，對未見其他文獻報道的兩種含氮雜環(huán)化合物：4—[2-(4，6—二甲氧基嘧啶基)]-3—硫代脲酸苯酯和4—氨基-6-特丁基-

2、3—甲硫基-1，2,4—三嗪-5(4H)—酮硫酸鹽的合成工藝路線進行研究，使之產(chǎn)物收率高并且操作簡便，安全。生物活性實驗表明這兩種含氮雜環(huán)化合物具有良好生物活性，極有可能創(chuàng)制成為具有我國自主知識產(chǎn)權(quán)的農(nóng)藥品種。 傳統(tǒng)的平板培養(yǎng)技術(shù)和熒光標(biāo)記末端限制性片段長度多態(tài)性分析技術(shù)相結(jié)合，對三種供試含氮雜環(huán)化合物：4—氨基-6-特丁基-3—甲硫基-1，2,4—三嗪-5(4H)—酮硫酸鹽；N—(4，6—二甲基嘧啶-2-基）苯胺；4—[2-(

3、4，6—二甲氧基嘧啶基)]-3—硫代脲酸苯酯進行麥田土壤細菌多樣性的研究。結(jié)果表明這三種含氮雜環(huán)化合物對土壤細菌的負面影響均較小，并且容易誘導(dǎo)出相應(yīng)的抗性菌株，生物相容性良好。將傳統(tǒng)方法和分子生物學(xué)手段相結(jié)合，使得實驗數(shù)據(jù)更加豐富、準(zhǔn)確和可靠，是一種對農(nóng)藥影響微生態(tài)判斷的有效方法。 首次將以質(zhì)粒pMS402為載體構(gòu)建的銅綠假單胞菌PAO1的隨機啟動子庫應(yīng)用于農(nóng)藥研究過程的篩選。通過對4—氨基-6-特丁基-3—甲硫基-1，2,4—

4、三嗪-5(4H)—酮硫酸鹽，N—(4，6—二甲基嘧啶-2-基)苯胺和3—乙基—N—(4—氟代苯甲叉)-5-甲基-4H-1，2,4，—三唑-4-胺三種能被銅綠假單胞菌降解的含氮雜環(huán)化合物高通量的全庫篩選，共獲得了7個與供試化合物降解有關(guān)的銅綠假單胞菌啟動子。通過測序、分析、比對后作出各啟動子的基因圖譜，并對其各自的功能進行初步的判定，其中兩個基因的功能比較明確，一個為乙酰輔酶A脫氫激酶，一個是磷酸轉(zhuǎn)移酶，其他的基因可能與轉(zhuǎn)運系統(tǒng)組成蛋白、