嗜殺蘋果酒酵母的選育.pdf

1、該文以優(yōu)良蘋果酒酵母AW(經(jīng)鑒定為乏酸缺陷)和具有核融合缺陷的嗜殺酵母5045為親株,采用原生質(zhì)體融合技術(shù)選育嗜殺蘋果酒酵母.以親朱AW原生質(zhì)體制備的條件,如預(yù)處理、菌體培養(yǎng)時(shí)間、酶濃度及酶解時(shí)間以及再生培養(yǎng)方法等進(jìn)行了研究,得到AW原生質(zhì)體的最佳制備條件:取對(duì)數(shù)生長(zhǎng)早期(培養(yǎng)8h)的細(xì)胞酶解前采用0.05MEDTA和0.5Mβ-巰基乙醇溶液(體積比為25:1)在30℃處理20min;采胳膊0.05mg/ml酶濃,酶解40~60min,

2、原生質(zhì)體形成率為99.7﹪—99.99﹪,雙層傾注法再生率為0.253﹪~0.161﹪.應(yīng)用35﹪的PEG(分子量為6000)作為促融劑,在30~大量處理燕果酒酵母AW和5045單倍體的原生質(zhì)體混合液20min,促使兩種原生質(zhì)體融合.獲得的融合子經(jīng)遺傳穩(wěn)定性實(shí)驗(yàn)、初篩和復(fù)篩、小型釀造實(shí)驗(yàn),最終篩選出一株發(fā)酵性能良好的嗜殺蘋果酒酵母F3.通過對(duì)F3的細(xì)胞形態(tài)、細(xì)胞大小、生孢子實(shí)驗(yàn)、營(yíng)養(yǎng)要求的測(cè)定、dsRNA質(zhì)粒的提取和瓊脂糖凝膠電泳以及發(fā)