水母半胱氨酸蛋白酶抑制劑cDNA在轉(zhuǎn)基因煙草中的表達(dá)及活性分析.pdf

1、半胱氨酸蛋白酶抑制劑(cystatin)廣泛存在于動物和植物之中，具有木瓜蛋白酶的抑制活性。本文所研究的cystatinJ是來自水母(Cyaneacapillata)的一個半胱氨酸蛋白酶抑制劑，具有cystatin家族典型的功能域及保守的二級結(jié)構(gòu)。　　本研究用水母半胱氨酸蛋白酶抑制劑cystatinJcDNA轉(zhuǎn)化煙草(Nicotianatabacum)，獲得轉(zhuǎn)基因植株，研究cystatinJ在植物中是否具有抗蟲的作用?！　”狙芯繕?gòu)建

2、了cystatinJ的表達(dá)載體pZYS8，利用農(nóng)桿菌將pZYS8導(dǎo)入煙草，對轉(zhuǎn)基因植株進(jìn)行了PCR，northernblot等分子生物學(xué)鑒定，檢測了轉(zhuǎn)基因植株蛋白粗提液對木瓜蛋白酶的抑制活性及其對昆蟲消化道蛋白酶的抑制作用。在16個PCR檢測呈陽性的轉(zhuǎn)基因株系中，有10個株系通過northernblot檢測到cystatinJ基因的表達(dá)。以N-苯甲酰-L-精氨酸乙酯(BAEE)為底物，用紫外分光光度法，檢測到這10個株系均有木瓜蛋白酶的

3、抑制活性，其中4個株系抑制活性較高。本研究還發(fā)現(xiàn)，斜紋夜蛾腸道蛋白酶中有部分的半胱氨酸蛋白酶活性，轉(zhuǎn)基因煙草蛋白粗提物對這些蛋白酶也有一定的抑制作用。這些結(jié)果表明，在轉(zhuǎn)基因煙草中表達(dá)的cystatinJ對木瓜蛋白酶具有一定的抑制作用，也能部分抑制斜紋夜蛾腸道蛋白酶活性?！　”狙芯康牧硪粋€工作，是用來自龍葵(Solanumamericanum)的蛋白酶抑制劑SaPIN2a和SaPIN2b的cDNA轉(zhuǎn)化畢赤酵母(Pichiapastori