高產(chǎn)乳鏈菌肽菌種選育及發(fā)酵培養(yǎng)基優(yōu)化.pdf

1、乳鏈菌肽作為一種天然防腐劑,在乳制品、肉制品、罐頭產(chǎn)品、飲品等行業(yè)中有廣泛應用。相比于化學防腐劑,具有高效、安全、無毒、易被人體內(nèi)消化酶降解,從而在體內(nèi)無蓄積等諸多優(yōu)勢,然而乳鏈菌肽效價低、生產(chǎn)成本高等因素限制了乳鏈菌肽的廣泛使用。目前,為了提高乳鏈菌肽的效價,人們對乳鏈菌肽培養(yǎng)基優(yōu)化和發(fā)酵過程優(yōu)化進行了大量的研究。
　　 本研究通過對實驗室保存的乳鏈菌肽生產(chǎn)菌株Lactococcus lactis subsp.lactisW2

2、8進行紫外線誘變處理,通過乳鏈菌肽耐受平板法、葡萄糖耐受平板法以及雙重抗性篩選法獲得乳鏈菌肽高產(chǎn)突變菌株,并通過搖瓶發(fā)酵實驗進行復篩,最終選育得到四株遺傳穩(wěn)定性好、乳鏈菌肽效價高的突變菌株,為GNK-1、GNK-4、SNK-5、SNK-10,四株菌中耐受nisin的最大濃度為7000IU／mL,葡萄糖為15％,其乳鏈菌肽效價分別為2200IU／mL、2105IU／mL、2274IU／mL、2178IU／mL,較原始菌株分別提高了1.90

3、、1.81、1.96、1.88倍。
　　 以紫外誘變獲得的乳鏈菌肽高產(chǎn)菌株GNK-1、GNK-4、SNK-5、SNK-10作為融合親本,進行Genome Shuffling,提高乳酸鏈球菌對乳鏈菌肽的耐受水平。通過高濃度乳鏈菌肽(8000IU／mL)和高濃度葡萄糖(15％)對融合細胞進行初篩,以搖瓶發(fā)酵實驗進行復篩,得到乳鏈菌肽效價高的融合子F2、F6,乳鏈菌肽效價能夠達到2426IU／mL、2525IU／mL,較原始菌株提高了

4、2.09倍和2.17倍。
　　 為了降低生產(chǎn)成本,采用菌糠處理液作為乳鏈菌肽生產(chǎn)菌的培養(yǎng)基質(zhì)。實驗首先對菌糠進行稀硫酸預處理,獲得實驗原料菌糠處理液。本研究主要考察了處理液的離子濃度、不同堿液回調(diào)處理液pH值對乳酸鏈球菌生長以及乳鏈菌肽效價的影響,發(fā)現(xiàn)當采用Ca(OH)2調(diào)節(jié)pH值的處理液原液培養(yǎng)乳酸鏈球菌時,菌體生長最好,菌體密度可達2.9×1011cfu／mL,只是乳鏈菌肽效價變化不明顯。
　　 本研究對以菌糠處理液