面粉中BPO添加量的調(diào)查及其對(duì)小鼠肝、腎組織損傷作用的研究.pdf

1、【目的】:
　　 過氧化苯甲酰(Benzoyl Peroxide，BPO)具有強(qiáng)氧化性，不僅可以使面粉增白，還加快面粉的熟化及提高小麥的出粉率，同時(shí)分解釋放苯甲酸防止面粉霉變，所以經(jīng)常在面粉生產(chǎn)中添加使用。目前市售面粉普遍添加BPO，且超標(biāo)現(xiàn)象嚴(yán)重。BPO在面粉食用過程中，能否加重肝、腎負(fù)擔(dān)成為人們關(guān)注的焦點(diǎn)。本實(shí)驗(yàn)通過建立一種簡(jiǎn)單、快速、準(zhǔn)確的測(cè)定面粉中BPO的高效液相色譜-紫外檢測(cè)法，對(duì)濟(jì)南市售面粉中BPO的添加量進(jìn)行調(diào)查。

2、并通過灌胃方式給予小鼠不同劑量的BPO，探討B(tài)PO對(duì)小鼠肝、腎組織的損傷作用。
　　 【方法】:
　　 1面粉中BPO含量測(cè)定的方法學(xué)研究
　　 采用高效液相色譜-紫外檢測(cè)法測(cè)定面粉中BPO的含量。
　　 色譜條件：色譜柱：Hypersil ODS(250mm×4.6mm，5μm)色譜柱；流動(dòng)相：20mmol/L磷酸二氫鉀-乙腈(90:10，V/V)；流速：1.0ml/min；檢測(cè)波長(zhǎng)：218nm；檢測(cè)溫

3、度：室溫；進(jìn)樣量：20μl。
　　 2濟(jì)南市售面粉中BPO添加量的調(diào)查
　　 2008年12月-2009年8月隨機(jī)從濟(jì)南市市場(chǎng)抽取銷售的面粉，共采集各類面粉53份，對(duì)面粉中BPO的添加量進(jìn)行測(cè)定。依據(jù)GB2760-2007，將面粉中BPO含量≤60mg/kg作為判定合格的標(biāo)準(zhǔn)。
　　 3 BPO對(duì)小鼠肝臟組織損傷作用的研究
　　 3.1 BPO對(duì)小鼠肝臟組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
　　 取各組小鼠的肝

4、組織勻漿，測(cè)定谷胱甘肽過氧化物酶(GSH-Px)、超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，研究BPO對(duì)小鼠肝臟抗氧化系統(tǒng)的影響。
　　 3.2 BPO對(duì)小鼠肝臟ATP酶活力的影響
　　 取各組小鼠肝組織勻漿，測(cè)定Na+ K+-ATPase、Ca2+-ATPase、Mg2+-ATPase的活力，研究BPO對(duì)小鼠肝臟ATP酶活力的影響。
　　 3.3 BPO對(duì)小鼠肝臟組織中鈣、鎂、鋅元素含量的影響

5、　　 稱取各組小鼠肝臟組織，在微波消解儀中進(jìn)行消化后，用火焰原子吸收分光光度法測(cè)肝臟組織中鈣、鋅、鎂含量，觀察BPO對(duì)肝臟必需元素含量的影響。
　　 3.4 BPO對(duì)小鼠肝臟功能的影響
　　 3.4.1 BPO對(duì)小鼠肝臟蛋白質(zhì)代謝的影響
　　 取各組小鼠的血清，測(cè)定總蛋白(TP)、白蛋白(ALB)、球蛋白(GLO)的含量，研究BPO對(duì)小鼠肝臟蛋白質(zhì)代謝的影響。
　　 3.4.2 BPO對(duì)小鼠肝臟膽汁酸代

6、謝的影響
　　 取各組小鼠的血清，測(cè)定總膽汁酸(TBA)的含量，研究BPO對(duì)小鼠膽汁酸代謝的影響。
　　 3.4.3 BPO對(duì)小鼠肝臟血清酶類的影響
　　 取各組小鼠的血清，測(cè)定谷丙轉(zhuǎn)氨酶(ALT)、谷草轉(zhuǎn)氨酶(AST)、堿性磷酸酶(ALP)的活力，研究BPO對(duì)小鼠血清酶類的影響。
　　 3.5 BPO對(duì)小鼠肝臟組織損傷的形態(tài)學(xué)觀察
　　 取各組小鼠肝臟組織固定、制作石蠟組織切片、蘇木素-伊紅(H

7、E)染色，于顯微鏡下進(jìn)行病理學(xué)觀察。
　　 4 BPO對(duì)小鼠腎臟組織損傷作用的研究
　　 4.1 BPO對(duì)小鼠腎臟組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
　　 取各組小鼠的腎組織勻漿，測(cè)定超氧化物歧化酶(SOD)活力和丙二醛(MDA)含量，研究BPO對(duì)小鼠腎臟抗氧化系統(tǒng)的損傷。
　　 4.2 BPO對(duì)小鼠腎臟組織中ATP酶的影響
　　 取各組小鼠腎組織勻漿，測(cè)定Na+ K+-ATPase、Ca2+-ATPase、

8、Mg2+-ATPase的活力，研究BPO對(duì)小鼠腎臟ATP酶活力的影響。
　　 4.3 BPO對(duì)小鼠腎臟組織中鈣、鋅、鎂元素含量的影響
　　 稱取各組小鼠腎臟組織，在微波消解儀中進(jìn)行消化后，用火焰原子吸收分光光度法測(cè)腎臟組織中鈣、鋅、鎂含量，研究BPO對(duì)小鼠腎臟必需元素含量的影響。
　　 4.4 BPO對(duì)小鼠腎臟功能的影響
　　 測(cè)定各組小鼠血清中肌酐(CRE)和尿素的含量，研究BPO對(duì)小鼠腎臟功能的影響。

9、
　　 4.5 BPO對(duì)小鼠腎臟組織損傷的形態(tài)學(xué)觀察
　　 取各組小鼠腎臟組織固定、制作石蠟組織切片、蘇木素-伊紅(HE)染色，于顯微鏡下進(jìn)行病理學(xué)觀察。
　　 【結(jié)果】:
　　 1面粉中BPO含量測(cè)定的方法學(xué)研究
　　 取處理后的BPO標(biāo)準(zhǔn)溶液經(jīng)光譜掃描，本實(shí)驗(yàn)選用218nm為檢測(cè)波長(zhǎng)。BPO在本實(shí)驗(yàn)條件中的保留時(shí)間為13.8min，在1-10μg/ml范圍內(nèi)線性良好(r=0.99991)，最低

10、檢出限(S/N=3)為0.2μg/ml，加標(biāo)回收率98.1-101.7％，日內(nèi)精密度RSD均小于2.98％，日間精密度RSD均小于3.14％。
　　 2濟(jì)南市售面粉中BPO添加量的調(diào)查
　　 檢測(cè)53份樣品，過氧化苯甲酰合格的35份(檢測(cè)值0-59.2mg/kg)，合格率為66.0％；超標(biāo)的18份(檢測(cè)值68.6-284.6mg/kg)，超標(biāo)率為34.0％。其中山東省與外省生產(chǎn)的面粉超標(biāo)率分別為33.3％和36.4％，兩

11、者相比無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。其中特制粉（包括特一粉、特二粉、特精粉、精制粉）與普通面粉超標(biāo)率分別為36.8％和32.4％，兩者相比差異無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＞0.05）。
　　 3 BPo對(duì)小鼠肝臟組織損傷作用的研究
　　 3.1 BPO對(duì)小鼠肝臟組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
　　 中、高BPO染毒劑量組小鼠肝組織中SOD活力明顯低于對(duì)照組(P＜0.05，P＜0.01)；BPO染毒組MDA含量有所升高，且高劑量組與對(duì)

12、照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；BPO各染毒組與對(duì)照組比較，小鼠肝組織中GSH-Px活力均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 3.2 BPO對(duì)小鼠肝臟ATP酶活力的影響
　　 BPO染毒組小鼠肝組織中Mg2+-ATP酶活力下降，且高劑量組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義（P＜0.05）；高劑量組Ca2+-ATP酶活力與對(duì)照組比較明顯降低（P＜0．05），其余劑量組與對(duì)照組比較無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；BPO染毒組

13、Na+K+-ATP活力與對(duì)照比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 3.3 BPO對(duì)小鼠肝臟組織中鈣、鎂、鋅元素含量的影響
　　 與對(duì)照組比較，BPO染毒組小鼠肝組織中鈣的含量降低，但無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)；與對(duì)照組比較，BPO染毒組小鼠肝組織中鋅、鎂的含量均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05）。
　　 3.4 BPO對(duì)小鼠肝臟功能的影響
　　 3.4.1 BPO對(duì)小鼠肝臟蛋白質(zhì)代謝的影響
　　

14、 BPO染毒組小鼠血清中TP、ALB含量降低，且高劑量組與對(duì)照組比較，差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)；BPO染毒組小鼠血清中GLO含量與對(duì)照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 3.4.2 BPO對(duì)小鼠肝臟總膽汁酸代謝的影響
　　 BPO染毒組小鼠血清中TBA含量升高，且高劑量組與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.01)。
　　 3.4.3 BPO對(duì)小鼠肝臟血清酶類的影響
　　 ALT含量隨BPO

15、染毒劑量增加先升高后降低，且中劑量組與對(duì)照組比較顯著升高(P＜0.05)。BPO各染毒組AST、ALP含量，與對(duì)照組比較均沒有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 3.5 BPO對(duì)小鼠肝臟組織損傷的形態(tài)學(xué)觀察
　　 BPO染毒組鏡下可見不同程度的炎細(xì)胞浸潤(rùn)，并出現(xiàn)肝細(xì)胞壞死、溶解。
　　 4 BPO對(duì)小鼠腎臟組織損傷作用的研究
　　 4.1 BPO對(duì)小鼠腎臟組織中抗氧化系統(tǒng)的影響
　　 與對(duì)照組相比

16、，BPO染毒高劑量組小鼠腎組織中SOD活性顯著降低，而MDA含量顯著升高(P＜0.05)。其余劑量組SOD活性、MDA含量與對(duì)照組比較差異均無統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＞0.05）。
　　 4.2 BPO對(duì)小鼠腎臟組織中ATP酶的影響
　　 BPO染量組Na+K+-ATP酶活力升高，且與對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.05)；BPO染毒組Mg2+-ATP酶活力下降，與對(duì)照組比較均有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01)；BPO染毒組Ca2+-

17、ATP酶活力降低，且高劑量組與對(duì)照組比較有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＜0.01）。
　　 4.3 BPO對(duì)小鼠腎臟組織中鈣、鋅、鎂元素含量的影響
　　 BPO染毒組小鼠腎組織中鈣、鋅、鎂元素的含量與對(duì)照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05）。
　　 4.4 BPO對(duì)小鼠腎臟功能的影響
　　 BPO染毒組小鼠血清中尿素的含量增加，且高劑量組與對(duì)照組比較差異有統(tǒng)計(jì)學(xué)意義(P＜0.05)；BPO染毒組小鼠血清中CRE的含量與

18、對(duì)照組比較均無統(tǒng)計(jì)學(xué)差異(P＞0.05)。
　　 4.5 BPO對(duì)小鼠腎臟組織損傷的形態(tài)學(xué)觀察
　　 顯微鏡下可見，BPO染毒造成小鼠腎小管不同程度的凝固性壞死現(xiàn)象。
　　 【結(jié)論】:
　　 1本研究建立的測(cè)定面粉中過氧化苯甲酰的高效液相色譜方法具有快速、準(zhǔn)確、靈敏、重復(fù)性好、樣品制備簡(jiǎn)便等優(yōu)點(diǎn)，能夠有效地分離、測(cè)定面粉中過氧化苯甲酰的含量。
　　 2濟(jì)南市場(chǎng)現(xiàn)售面粉中大都添加了增白劑BPO，且出