環(huán)氧化物水解酶產(chǎn)生菌的篩選及其發(fā)酵條件和對(duì)苯基縮水甘油醚類(lèi)化合物拆分條件的研究.pdf

1、手性環(huán)氧化物及其水解產(chǎn)物鄰二醇是合成許多生物活性物質(zhì)和手性目標(biāo)產(chǎn)物的高價(jià)值中間體。
　　 本實(shí)驗(yàn)以鄰甲氧基苯基縮水甘油醚為唯一碳源進(jìn)行多輪富集，從土壤中獲得380多株能利用該環(huán)氧化物的微生物。之后用TLC法定性篩選出25株具有環(huán)氧化物水解酶活性的菌株，之后再通過(guò)HPLC法篩選出5株具有立體選擇性的菌株，從中選取最好的一個(gè)菌株進(jìn)行下一步研究并進(jìn)行菌株鑒定，經(jīng)過(guò)形態(tài)觀察及ITS基因序列分析，確定該菌株為Botryosphaeria

2、dothidea，編號(hào)為ZJUZQ007。
　　 以單因素方法，對(duì)發(fā)酵培養(yǎng)基的配方及發(fā)酵條件進(jìn)行了優(yōu)化，考察了不同的碳源、氮源、金屬離子及濃度、發(fā)酵培養(yǎng)基初始pH值、菌體培養(yǎng)溫度以及底物誘導(dǎo)對(duì)菌株的生長(zhǎng)及酶活的影響。最終確立了菌株Botryosphaeria d.ZJUZQ007的最優(yōu)發(fā)酵培養(yǎng)基配方：以2％乳糖為碳源，2％玉米粉為氮源，金屬離子為2mmol/L的Fe2+，1％的NaCl，最適培養(yǎng)條件為30℃，最適pH在4.0-7

3、.0之間，發(fā)酵時(shí)間為72h，該酶為非誘導(dǎo)型酶，無(wú)需加入底物做誘導(dǎo)劑。
　　 對(duì)Botryosphaeria d.環(huán)氧化物水解酶拆分鄰甲氧基苯醚（EMPP）、鄰甲基苯醚（o-GMPE）、間甲基苯醚（m-GMPE）、對(duì)甲基苯醚（p-GMPE）四種環(huán)氧化物的反應(yīng)條件進(jìn)行了優(yōu)化。確定了最佳反應(yīng)溫度為30℃，最適緩沖液pH為7.6及最適反應(yīng)時(shí)間為40min，在此反應(yīng)條件下，（R）-EMPP的e.e.s和E值分別達(dá)到了99.9％和50.4，