以大腸桿菌或家蠶絲腺為基礎(chǔ)的無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)的構(gòu)建.pdf

1、伴隨著大量生物遺傳信息的被人類解讀出來(lái)，一種可以快速、高通量合成蛋白質(zhì)的方法成為了一種迫切的需求。無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)由于蛋白質(zhì)合成能力強(qiáng)、操作快速簡(jiǎn)單、適于高通量表達(dá)各種蛋白質(zhì)受到廣泛關(guān)注。本論文研究的目的就是通過(guò)優(yōu)化大腸桿菌無(wú)細(xì)胞抽提物的制備方法降低無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)的制備成本，提高蛋白質(zhì)合成能力，為無(wú)細(xì)胞系統(tǒng)的廣泛應(yīng)用打下基礎(chǔ)；同時(shí)，嘗試?yán)眉倚Q絲腺構(gòu)建的新的無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)，拓展制備無(wú)細(xì)胞抽提物的細(xì)胞來(lái)源，并在真核蛋白質(zhì)的體外合成方

2、面有廣闊前景。
　　 本論文選擇eGFP作為報(bào)告基因，利用pIVEX2.4c作為大腸桿菌無(wú)細(xì)胞蛋白質(zhì)合成系統(tǒng)的表達(dá)模板構(gòu)建表達(dá)質(zhì)粒pIVEX2.4c-eGFP。選擇E.coli BL21(DE3)作為制備無(wú)細(xì)胞抽提物的菌種，測(cè)定其生長(zhǎng)曲線，確定細(xì)胞生長(zhǎng)的對(duì)數(shù)生長(zhǎng)期。優(yōu)化大腸桿菌無(wú)細(xì)胞抽提物的制備流程，簡(jiǎn)化操作步驟和成本，提高蛋白質(zhì)合成能力，eGFP表達(dá)量可以達(dá)到427μg/mL。這是國(guó)內(nèi)首次報(bào)道通過(guò)改進(jìn)抽提物制備方法構(gòu)建高效的大