海馬骨粉多肽制備及其抗氧化活性研究.pdf

1、海馬作為一種具有極高藥用價值的海洋藥源生物，在我國一直被視為一種名貴中藥，具有強身健體、補腎壯陽、舒經(jīng)活絡(luò)、消炎止痛、止咳平喘之功效，極具開發(fā)保健品潛力。隨著海區(qū)天然資源的過度捕撈導(dǎo)致野生海馬資源的匱乏，人工養(yǎng)殖已在我國形成了一定的布局，這也為海馬深加工利用提供了一定的資源基礎(chǔ)。本實驗主要是以三斑海馬為原料，利用超臨界流體萃取技術(shù)對海馬骨粉脂肪進行萃取工藝研究，并通過 GC-MS對其脂肪酸進行分析；然后應(yīng)用響應(yīng)面實驗設(shè)計法對海馬脫脂骨粉

2、蛋白酶酶解工藝進行優(yōu)化；最后再對酶解多肽進行分離并驗證其抗氧化能力的大小。
　?。?）對成年三斑海馬采用超臨界萃取脂肪工藝研究中，萃取壓強對海馬骨粉酯類萃取率的影響最大，其次是萃取時間、萃取溫度和 CO2流量；經(jīng)正交實驗得到萃取海馬骨粉酯類的最佳工藝條件為：萃取壓強35Mpa，萃取溫度58℃，萃取時間135min，CO2流量15L/h。在此優(yōu)化條件下，海馬骨粉脂質(zhì)萃取率為1.81％。經(jīng) GC-MS分析，所得萃取物中主要含15種脂肪

3、酸，其中不飽和脂肪酸占總脂肪酸的39.10%，EPA和DHA分別占不飽和脂肪酸的5.55%和11.00%。
　　（2）在5種蛋白酶中篩選出兩種酶解效果較好的酶進行單因子試驗，并在單因子試驗基礎(chǔ)上，采用響應(yīng)面法對兩種單酶酶解工藝進行優(yōu)化，在優(yōu)化基礎(chǔ)上進行復(fù)合酶解效果研究，最后對選取的最佳酶解效果的酶解液進行電泳，測定多肽分子量分布情況。堿性蛋白酶最佳酶解工藝為：溫度54.70℃、pH9、時間6h；胰蛋白酶酶解工藝為：溫度45℃、pH

4、8.8、時間4h；復(fù)合酶解工藝選取先胰蛋白酶酶解再堿性蛋白酶酶解，復(fù)合酶解工藝最佳水解度為14.41%；海馬酶解多肽更多的是在30kDa以下。
　?。?）通過利用葡聚糖 G-50層析系統(tǒng)來對海馬酶解骨粉多肽進行分離，并對分離后的多肽根據(jù)出峰時間分為三個區(qū)間，然后分區(qū)間進行收集并干燥，再利用對多肽的還原力、DPPH清除率、超氧陰離子清除率、羥自由基清除率等進行測定其功能，表明海馬骨粉多肽的還原力、DPPH自由基清除率、超氧陰離子自由