長江上游兩種銅魚屬魚類種間特異性ISSR分子標(biāo)記及遺傳多樣性研究.pdf

1、本研究選取長江上游兩種銅魚屬(Coreius)魚類——銅魚(Coreius heterodon(Bleeker))和圓口銅魚(Coreius guichenoti(Sauvage et Dabry))作為研究對象，篩選它們的種間特異性間微衛(wèi)星標(biāo)記(ISSR，Inter simple sequence repeats)，為銅魚和圓口銅魚及其早期資源的種類鑒定提供新的更為簡便準(zhǔn)確的分子生物學(xué)方法，為長江上游產(chǎn)漂流性卵魚類的生物學(xué)及生態(tài)學(xué)調(diào)查

2、研究提供技術(shù)支撐和基礎(chǔ)資料。同時，采用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)分析了長江上游銅魚和圓口銅魚的遺傳多樣性及遺傳分化狀況，為更全面地揭示其種群遺傳多樣性現(xiàn)狀提供新的資料，為研究這些魚類群體遺傳結(jié)構(gòu)的變化和適應(yīng)環(huán)境的遺傳機制提供可供比較的基礎(chǔ)資料。
　　 本研究于2009年4月至2009年05月，在長江上游干流合江、木洞和豐都3個地點采集銅魚和圓口銅魚幼魚標(biāo)本，每個地點每種魚的樣本量為30條。通過對銅魚和圓口銅魚的基因組DNA進(jìn)行ISSR

3、-PCR，從100個ISSR引物中篩選得到了3個特異性ISSR引物：UBC835、UBC836和UBC861，其PCR擴增產(chǎn)物的凝膠電泳圖譜上具有5條銅魚特有的電泳條帶，分別命名為TYUBC835-600，TYUBC836-240、540、620，TYUBC861-520；另有7條圓口銅魚特有的電泳條帶，分別命名為YKUBC835-1000、1400；YKUBC836-570、680；YKUBC861-460、800、1200。上述結(jié)果

4、表明，利用ISSR分子標(biāo)記技術(shù)獲得的銅魚和圓口銅魚的種間特異性條帶可有效地區(qū)分銅魚屬的銅魚和圓口銅魚。本研究從野外采集的魚卵中選取了經(jīng)形態(tài)學(xué)方法初步鑒定為銅魚屬魚卵和初孵仔魚，用上述3個ISSR引物對其基因組DNA其進(jìn)行PCR擴增，發(fā)現(xiàn)其中1粒魚卵和4條仔魚都具有與銅魚幼魚相同的特有條帶，即TYUBC836-240、540、620，TYUBC861-520，提示這5份樣本可能為銅魚。
　　 同時，本研究還通過統(tǒng)計分析上述3個IS

5、SR引物對銅魚和圓口銅魚進(jìn)行PCR擴增所生成的電泳條帶數(shù)量，對銅魚和圓口銅魚的遺傳多樣性進(jìn)行了評估。通過計算銅魚和圓口銅魚的遺傳多樣性參數(shù)進(jìn)行并與同類研究結(jié)果相比較，發(fā)現(xiàn)長江上游銅魚和圓口銅魚的遺傳多樣性相對豐富，受生境改變的影響不明顯。利用群體間遺傳距離對銅魚和圓口銅魚群體進(jìn)行聚類分析，結(jié)果顯示，銅魚的3個地理群體聚為兩支，圓口銅魚的3個地理群體也聚為兩支，但兩種魚的聚類情況存在差異，分析這可能與兩種魚來自長江上游江段的魚卵和仔魚的成