生姜中降血糖物質(zhì)的初步篩選.pdf

1、現(xiàn)今，糖尿病患病率、死亡率、致殘率都明顯升高，且呈現(xiàn)流行趨勢(shì)，已經(jīng)成為繼心腦血管、腫瘤之后的又一大危害人類健康的慢性疾病，因此在天然產(chǎn)物中找尋新的降糖功能因子已經(jīng)成為現(xiàn)今的研究熱點(diǎn)。α-葡萄糖苷酶抑制劑和α-淀粉酶抑制劑是兩種廣泛應(yīng)用于糖尿病臨床治療的新型口服藥物，其以糖的消化、吸收和代謝途徑為切入點(diǎn)，可用于各種類型的糖尿病，并可以有效減少糖尿病并發(fā)癥，因此在天然產(chǎn)物中開發(fā)安全性高、有效成分明確的天然降血糖藥物具有十分廣闊的空間及應(yīng)用前

2、景。
　　本文以云南羅平小黃姜為原料，用α-葡萄糖苷酶活性潛力為導(dǎo)向，采用α-葡萄糖苷酶抑制劑體外篩選模型，從生姜中篩選α-葡萄糖苷酶抑制劑，確定其酶的抑制類型，建立四氧嘧啶所致高血糖小鼠模型，研究具有α-葡萄糖苷酶抑制作用的生姜提取物對(duì)高血糖小鼠餐后血糖值及一般狀況的影響，采用大孔樹脂對(duì)有抑制活性的生姜提取物進(jìn)行初步純化，為深入理解生姜的降糖作用提供實(shí)驗(yàn)基礎(chǔ)。主要研究結(jié)果如下：
　?。?）體外篩選模型與生姜品種的篩選

3、>　　得到了優(yōu)化的體外篩選模型為：總反應(yīng)體積設(shè)定為1.0 mL，依次加入酶液（10 mg/mL）0.2 mL，磷酸緩沖溶液（pH6.8）0.5 mL，生姜提取液0.2 mL，經(jīng)37℃水浴反應(yīng)10 min后加入麥芽糖底物（0.5 mol/L）0.1 mL，反應(yīng)25 min后，用Na2CO3溶液（1 mol/L）1.0 mL終止反應(yīng)。應(yīng)用該模型對(duì)34種生姜品種醇提液的α-葡萄糖苷酶抑制能力進(jìn)行了研究和比較，其中云南羅平小黃姜抑制活性最高，抑

4、制率達(dá)88.58％，且其酶抑制活性與其濃度呈正相關(guān)。
　　（2）生姜α-葡萄糖苷酶抑制劑和α-淀粉酶抑制劑的最佳提取工藝條件及酶動(dòng)力學(xué)研究
　　乙醇提取云南羅平小黃姜中α-葡萄糖苷酶抑制劑影響因素大小為浸提時(shí)間＞料液比＞乙醇體積分?jǐn)?shù)，最佳提取工藝為料液比為1:3，浸提時(shí)間1.0 h，乙醇體積分?jǐn)?shù)90%，抑制率可達(dá)91.77%。乙酸乙酯提取云南羅平小黃姜中α-淀粉酶抑制劑影響因素大小為料液比＞浸提時(shí)間＞浸提溫度，最佳提取工藝為

5、料液比為1:3，浸提時(shí)間為2.0 h，浸提溫度為40℃，抑制率可達(dá)69.71%。生姜乙醇提取液對(duì)α-葡萄糖苷酶的抑制作用屬可逆性抑制中的非競(jìng)爭(zhēng)性抑制，米氏常數(shù)為3.14×10-3 mol/L。生姜中α-淀粉酶抑制劑對(duì)α-淀粉酶的抑制類型為不可逆抑制，米氏常數(shù)為-0.205×10-3 mol/L。
　?。?）生姜α-葡萄糖苷酶抑制劑對(duì)小鼠體內(nèi)治療效果的驗(yàn)證
　　生姜α-葡萄糖苷酶抑制劑在正常小鼠負(fù)荷淀粉后0.5 h時(shí)降糖效果顯

6、著，血糖值與空白組相比下降了5 mmol/L，與阿卡波糖接近，差異不顯著（P＞0.05），但降低餐后血糖的持續(xù)性效果低于阿卡波糖，在淀粉負(fù)荷1.0-1.5 h期間的降糖效果極其顯著低于（P＜0.01）阿卡波糖降糖效果。在提高正常小鼠餐后血清胰島素水平有很好的作用，且效果優(yōu)于阿卡波糖組。灌胃生姜α-葡萄糖苷酶抑制劑對(duì)正常小鼠體重、飲水量、攝食量影響效果均不明顯。
　　生姜α-葡萄糖苷酶抑制劑在高血糖小鼠淀粉負(fù)荷后0.5 h時(shí)血糖值與

7、空白組相比下降6.41 mmol/L，能極其顯著降低（p＜0.01）小鼠淀粉負(fù)荷后0.5 h時(shí)的血糖水平，但降糖效果低于阿卡波糖降糖效果且差異顯著（p＜0.05）。對(duì)高血糖小鼠多飲多食多尿體重減少的癥狀具有很好的治療效果。
　?。?）生姜α-葡萄糖苷酶抑制劑對(duì)高血糖小鼠預(yù)防效果的驗(yàn)證
　　預(yù)防給予生姜α-葡萄糖苷酶抑制劑對(duì)四氧嘧啶所致高血糖小鼠具有很好的保護(hù)作用，給藥0.5 h時(shí)能顯著降低（p＜0.05）淀粉負(fù)荷后高血糖小鼠

8、血糖值5.57 mmol/L。預(yù)防給予生姜α-葡萄糖苷酶抑制劑后可以顯著緩解四氧嘧啶所致糖尿病小鼠的三多一少癥狀。
　　（5）大孔樹脂初步純化生姜中α-葡萄糖苷酶抑制劑工藝條件的研究
　　從AB-8、AL-1、S-8、HPD-400﹑D4020等5大孔樹脂中篩選出對(duì)生姜中α-葡萄糖苷酶抑制劑類物質(zhì)吸附和解吸性能最好的是AB-8型樹脂，并確定了AB-8型大孔樹脂純化生姜中α-葡萄糖苷酶抑制劑類物質(zhì)的最佳工藝：上樣液pH值為6，