原位產(chǎn)生共反應(yīng)試劑及納米材料構(gòu)建的高靈敏電化學(xué)發(fā)光免疫傳感器的研究.pdf

1、電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器是將免疫傳感器與電致化學(xué)發(fā)光(ECL)技術(shù)結(jié)合而發(fā)展起來(lái)的具有高選擇性、高靈敏度、低背景等優(yōu)點(diǎn)的生物傳感器。為達(dá)到臨床診斷治療對(duì)痕量蛋白質(zhì)定量測(cè)定的要求，免疫分析信號(hào)增強(qiáng)技術(shù)一直都是免疫分析領(lǐng)域研究的一個(gè)重要方向，在電極表面原位產(chǎn)生發(fā)光試劑的共反應(yīng)試劑為免疫分析的研究與發(fā)展提供了新的思路。因此，將酶反應(yīng)引入ECL反應(yīng)中原位產(chǎn)生共反應(yīng)試劑結(jié)合納米材料特有的優(yōu)點(diǎn)對(duì)發(fā)展高靈敏的免疫傳感器起到重要的理論意義和實(shí)際的應(yīng)用價(jià)值

2、。
　　 本論文主要從以下幾個(gè)方面開(kāi)展研究工作：
　　 1.基于L-半胱氨酸膜增強(qiáng)過(guò)硫酸根的電致化學(xué)發(fā)光構(gòu)建電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器
　　 該工作首次將過(guò)硫酸根/溶解氧這一發(fā)光體系用于免疫分析。首先，L-半胱氨酸(L-Cys)沉積于金電極的表面，促進(jìn)電子傳遞，從而增強(qiáng)過(guò)硫酸根發(fā)光體系的光信號(hào)。然后，納米金通過(guò)L-Cys表面的氨基吸附于電極表面，增強(qiáng)了電極表面對(duì)抗體的吸附能力，同時(shí)促進(jìn)電子傳遞，進(jìn)一步放大ECL信號(hào)。

3、接著，納米金與抗體的氨基形成共價(jià)鍵，將抗體修飾于電極表面。最后，牛血清白蛋白(BSA)用于封閉非特異性位點(diǎn)，防止非特異性吸附。該ECL免疫傳感器利用L-Cys和納米金共同放大免疫反應(yīng)信號(hào)，提高了免疫傳感器的靈敏度。在最優(yōu)的實(shí)驗(yàn)條件下檢測(cè)甲胎蛋白。其線(xiàn)性范圍為0.01-100 ng/mL，檢測(cè)限為3.3 pg/mL。該傳感器制備簡(jiǎn)單，具有良好的選擇性和重現(xiàn)性。
　　 2.基于原位產(chǎn)生過(guò)硫酸根的共反應(yīng)試劑用于構(gòu)建超靈敏的電致化學(xué)發(fā)光

4、免疫傳感器
　　 溶解氧作為過(guò)硫酸根共反應(yīng)試劑存在標(biāo)記困難，檢測(cè)底液中濃度低的缺點(diǎn)。利用酶的催化反應(yīng)，在電極表面原位產(chǎn)生溶解氧，以解決上述缺點(diǎn)。首先利用硼氫化鈉在功能化碳納米管(FCNTs)表面還原氯鉑酸。制備FCNTs-PdNPs納米復(fù)合物，該納米復(fù)合物用于吸附二抗(aiti-AFP)。葡糖糖氧化酶(GOD)和辣根過(guò)氧化物酶(HRP)用于封閉納米復(fù)合物的非特異性位點(diǎn)，最終制備了FCNTs-PdNPs@anti-AFP@GOD-

5、HPR生物偶合物。通過(guò)夾心法將制備的生物偶合物吸附予電極表面，發(fā)光試劑過(guò)硫酸根存在于檢測(cè)底液中，同時(shí)檢測(cè)底液中加入適量的葡鈞糖。GOD首先催化葡萄糖產(chǎn)生H2O2，接著H2O2被HPR催化在電極表面原位產(chǎn)生O2。PdNPs作為催化劑，催化過(guò)硫酸根與氧氣的電化學(xué)發(fā)光反應(yīng)，進(jìn)一步催化放大光信號(hào)，提高檢測(cè)靈敏度。在最優(yōu)條件下檢測(cè)甲胎蛋白，其線(xiàn)性范圍為0.01 pg/mL-100 ng/mL。同時(shí)該傳感器具有較好的重現(xiàn)性和選擇性，有望應(yīng)用于臨床分

6、析診斷。
　　 3.基于原位產(chǎn)生魯米諾的共反應(yīng)試劑用于構(gòu)建超靈敏的電致化學(xué)發(fā)光免疫傳感器
　　 魯米諾-H2O2發(fā)光體系被廣泛應(yīng)用于免疫分析，但H2O2作為魯米諾的共反應(yīng)試劑存在標(biāo)記困難和不穩(wěn)定的問(wèn)題。該工作將酶反應(yīng)引入ECL反應(yīng)中，原位產(chǎn)生H2O2，成功解決上述問(wèn)題。首先利用硼氫化鈉在功能化碳納米管(FCNTs)表面還原氯鉑酸，制備FCNTs-PdNPs納米復(fù)合物。該納米復(fù)合物用于吸附二抗(anti-AFP)。葡萄糖氧