十子代平方及其有效成分對(duì)二肽基肽酶Ⅳ活性影響的實(shí)驗(yàn)研究.pdf

1、目的：通過十子代平方干預(yù)自發(fā)性2型糖尿病（T2DM）GK大鼠的動(dòng)物藥效實(shí)驗(yàn)及該方、組方中藥、單味中藥主要有效成分抑制二肽基肽Ⅳ（DPP-4）活性體外篩選實(shí)驗(yàn)，觀察十子代平方對(duì) T2DM大鼠的降糖效應(yīng)及對(duì) DPP-4的抑制作用，明確該方中抑制 DPP-4的主要單味藥物及有效成分，為該方的臨床應(yīng)用及其有效成分配方的開發(fā)提供實(shí)驗(yàn)依據(jù)。
　　方法：1選取 SPF級(jí) GK大鼠45只，高脂飼料連續(xù)喂養(yǎng)4周，以餐后2小時(shí)（PG2h）血糖＞11.

2、1 mmo/L為成模標(biāo)準(zhǔn)，將成模T2DM大鼠隨機(jī)分為模型組、二甲雙胍組、十子代平方高、中、低劑量組（16、8、4g/kg，折合生藥量），另外選取 Wistar大鼠作為正常對(duì)照組，治療前，治療后分別測(cè)定餐后2小時(shí)血糖（PG2h），空腹血糖（FBG），給藥第8周測(cè)定糖化血紅蛋白（HbAlc），實(shí)驗(yàn)結(jié)束時(shí)取 GK大鼠腹主動(dòng)脈血，測(cè)定糖化血清蛋白（GSP），甘油三酯（TG），總膽固醇（CHO），低密度脂蛋白（LDL-C），高密度脂蛋白（HDL-

3、C）水平，胰高血糖素樣肽-1（GLP-1）含量以及DPP-4活性，取GK大鼠胰腺，Western-blot方法檢測(cè)GLP-1蛋白表達(dá)量；2以 DPP-4酶、Tris-hcl緩沖液、Gly-Pro-pNA底物建立抑制 DPP-4活性體外篩選體系，選擇不同濃度磷酸西格列汀片對(duì)該體系進(jìn)行驗(yàn)證，通過已建立的抑制 DPP-4活性體外篩選體系對(duì)十子代平方及組方中藥菟絲子、萊菔子、車前子、茺蔚子、枸杞子、決明子、女貞子、梔子、蘇子、五味子及主要有效成

4、分京尼平苷酸、大黃酚、鹽酸水蘇堿、甜菜堿、芥子堿硫氰酸鹽、特女貞苷、金絲桃苷、梔子苷、迷迭香酸、五味子醇甲、五味子甲素、五味子乙素進(jìn)行抑制DPP-4活性體外篩選實(shí)驗(yàn)，測(cè)定吸光度（OD），計(jì)算IC50。
　　結(jié)果：1十子代平方可以降低T2DM大鼠FBG水平，各治療組與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01）。十子代平方各組 PG2h水平明顯低于模型組（P＜0.05，P＜0.01），但高于二甲雙胍組。十子代平方高、中、低

5、劑量組可有效降低 HbAlc及 GSP的水平，與模型組比較均有顯著性差異（P＜0.05， P＜0.01）。十子代平方高、中、低各劑量組均能降低 TG及 CHO水平，且與模型組比較有顯著性差異（P＜0.05，P＜0.01），十子代平方高劑量組與模型組比較可以顯著降低 LDL-C水平（P＜0.05），十子代平方各劑量組與模型組比較 HDL-C水平?jīng)]有統(tǒng)計(jì)學(xué)差異（P＞0.05），但具有提高HDL-C的趨勢(shì)。十子代平方高、中、低劑量組均可有效抑

6、制 DPP-4活性，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.01）。與模型組比較，十子代平方各劑量組血清 GLP-1含量均高于模型組（P＜0.01）。十子代平方高、中劑量組可以增加胰腺 GLP-1蛋白表達(dá)量，與模型組比較有顯著性差異（P＜0.01）；2體外篩選實(shí)驗(yàn)顯示，十子代平方抑制 DPP-4 IC50值為（5611.651±905.286） mg/L，萊菔子 IC50為（382.554±7.7496） mg/L，菟絲子IC50為（843.

7、391±135.23） mg/L，梔子 IC50為（1027.921±104.316） mg/L，梔子苷 IC50為（0.075±0.004） mmol/L，鹽酸水蘇堿 IC50為（2.638±0.715） mmol/L，金絲桃苷 IC50為（3.135±0.656）mmol/L，芥子堿硫氰酸鹽 IC50為（6.975±1.099）mmol/L，甜菜堿IC50為（60.265±29.117）mmol/L。
　　結(jié)論：十子代平方可以

8、改善 T2DM大鼠糖脂代謝，抑制 DPP-4活性、提高 GLP-1含量可能是該方的作用機(jī)制之一，組方中萊菔子、菟絲子、梔子對(duì) DPP-4抑制作用較強(qiáng)。有效成分中梔子苷、鹽酸水蘇堿、金絲桃苷、芥子堿硫氰酸鹽、甜菜堿具有一定的 DPP-4抑制作用，其中梔子苷作用明顯，有效成分的 DPP-4抑制作用與單味中藥具有相關(guān)性并優(yōu)于單味中藥，單味中藥優(yōu)于復(fù)方，由此說明上述有效成分可能是該配方抑制 DPP-4發(fā)揮降糖作用的主要活性成分，本研究為該方臨床