羊胎盤(pán)提取殘留物高質(zhì)化利用研究.pdf

1、羊胎盤(pán)含有多種生物活性物質(zhì)，具有抗氧化、降血糖、抗菌抗病毒和提高機(jī)體免疫力等多種生理功效。我國(guó)羊胎盤(pán)資源豐富，但是對(duì)羊胎盤(pán)的利用率不足3％，因此，以羊胎盤(pán)為原料進(jìn)行綜合開(kāi)發(fā)利用具有積極的現(xiàn)實(shí)意義和廣闊的市場(chǎng)前景。
　　本文以羊胎盤(pán)提取殘留物高質(zhì)化利用為目的，首先對(duì)提取水溶性物質(zhì)后的羊胎盤(pán)殘余物進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)價(jià)值分析，然后采用產(chǎn)蛋白酶微生物黑曲霉、米曲霉、枯草芽孢桿菌、地衣芽孢桿菌對(duì)其進(jìn)行發(fā)酵酶解并對(duì)產(chǎn)物的生物活性進(jìn)行研究，得到了抗氧化和

2、免疫活性肽的最佳制備工藝并對(duì)產(chǎn)物的穩(wěn)定性和各組分的含量與活性進(jìn)行研究。
　　主要結(jié)果如下：
　?。?）羊胎盤(pán)提取水溶性物質(zhì)后的殘余物進(jìn)行營(yíng)養(yǎng)價(jià)值分析：羊胎盤(pán)提取殘余物是一種優(yōu)質(zhì)的蛋白，其蛋白質(zhì)功效比（PER值）為1.27，干基總蛋白含量為97.67%，其中氨基酸含量依次為：谷氨酸（10.24%）、甘氨酸（9.51%）、天門(mén)冬氨酸（6.56%）、精氨酸（5.65%）、亮氨酸（5.46%）、脯氨酸（5.41%）。氨基酸組成合理，

3、其第一限制性氨基酸為異亮氨酸和纈氨酸，兩者的氨基酸評(píng)分均為0.71。
　?。?）采用4種產(chǎn)蛋白酶微生物發(fā)酵羊胎盤(pán)提取殘余物制備具有抗氧化和免疫增殖活性的酶解產(chǎn)物。結(jié)果表明，四種微生物在各自適宜的發(fā)酵溫度和發(fā)酵pH條件下以黑曲霉的多肽產(chǎn)率29.67%最多，依次是枯草芽孢桿菌27.58%，地衣芽孢桿菌26.04%，米曲霉24.3%；考察產(chǎn)物的生物活性，其中以黑曲霉發(fā)酵產(chǎn)物的抗氧化活性最高，枯草芽孢桿菌發(fā)酵產(chǎn)物的免疫細(xì)胞增殖活性最高。<

4、br>　?。?）黑曲霉發(fā)酵酶解羊胎盤(pán)提取殘留物制備抗氧化肽的最優(yōu)工藝條件為：接種量5%、發(fā)酵溫度30℃、料液pH5.6、碳源2.8%、發(fā)酵時(shí)間76.4h，所得的發(fā)酵液DPPH·清除率83.78%，多肽得率為30.90%；枯草芽孢桿菌發(fā)酵羊胎盤(pán)提取殘留物制備免疫活性肽的最優(yōu)工藝即料液發(fā)酵溫度37℃、pH5.4、碳源1.7%、發(fā)酵時(shí)間43.5 h，進(jìn)行驗(yàn)證試驗(yàn)，測(cè)得酶解產(chǎn)物的刺激指數(shù)達(dá)到了24.38%，多肽得率27.89%。
　?。?

5、）研究發(fā)酵產(chǎn)物多肽的活性和體外的穩(wěn)定性，分別研究了產(chǎn)物的量效關(guān)系，pH值的影響，干燥方式、體外模擬消化?？寡趸牡淖杂苫宄孰S著濃度的升高逐漸增大，相同濃度下對(duì)自由基的清除能力要稍高于（谷胱甘肽）GSH的清除能力。免疫活性肽蛋白濃度在6.25-200μg/mL范圍內(nèi)對(duì)小鼠脾臟淋巴細(xì)胞具有明顯的增殖作用，在低于100μg/mL濃度時(shí)，隨著發(fā)酵液蛋白濃度的增加，刺激指數(shù)隨之增加，在濃度100μg/mL濃度時(shí)淋巴細(xì)胞的增殖率達(dá)到23.25%

6、。
　　抗氧化肽在pH5-8范圍內(nèi)，活性較穩(wěn)定，過(guò)酸或者過(guò)堿的環(huán)境中產(chǎn)物活性下降；干燥方法對(duì)產(chǎn)物的活性沒(méi)有產(chǎn)生太大影響，黑曲霉酶解產(chǎn)物的活性保持分別為97.6%和91.7%，對(duì)枯草芽孢桿菌酶解產(chǎn)物免疫保持90%以上。
　　模擬胃液、腸液中，發(fā)酵酶解產(chǎn)物的抗氧化活性保持率優(yōu)于免疫活性；當(dāng)胃液消化150 min時(shí)，產(chǎn)物對(duì)DPPH·清除率為50.88%，對(duì)·OH清除率為50.39%，其活性保持率分別為64.45%和58.46%；當(dāng)

7、腸液消化300 min時(shí)，其清除率保持分別為53.87%和63.18%，活性保持率分別為68.28%和73.13%，模擬胃液和腸液消化中免疫活性保持活性保持了44.61%和52.89%。
　?。?）以抗氧化性和體外免疫性為考察指標(biāo)，對(duì)產(chǎn)物各超濾組分的體外生物活性進(jìn)行了分析探究。結(jié)果表明，具有較高抗氧化能力的組分YT-Ⅰ（＜3 KDa）、YT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）占黑曲霉發(fā)酵酶解蛋白總量的61.4%超過(guò)50%，可見(jiàn)分子量少

8、于10 kDa的低分子蛋白組分對(duì)羊胎盤(pán)提取殘余物的抗氧化活性起著主要的貢獻(xiàn)，多肽含量分布滿足函數(shù)關(guān)系方程的曲線y=0.0006X2-0.0932X+3.1345；
　　枯草芽孢桿菌的發(fā)酵酶解組分中MT-Ⅰ（＜3 KDa）、MT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）占總量的85%，MT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）對(duì)酶解產(chǎn)物的免疫增殖能力起到重要作用，MT-Ⅰ（＜3 KDa）具有較高的抗氧化活性，MT-Ⅱ（3 KDa-10 KDa）與M