熒光標(biāo)記腐敗菌PJ-9拮抗菌的篩選、鑒定與發(fā)酵條件優(yōu)化研究.pdf

1、腐敗是造成食物浪費的主要因素之一，食物腐敗是由其內(nèi)外環(huán)境及微生物共同作用的結(jié)果，引起食物腐敗的微生物類型很多。由于食物腐敗引起了巨大的浪費，在古代，人們通過鹽澤的方式來保藏食物。隨著科技的發(fā)展，人類用來保藏食物的方法越來越多，如低溫冷藏、添加防腐劑以及高溫殺菌。其中在大部分即食食物中通過添加防腐劑來防腐，但是防腐劑是一種化學(xué)試劑，本身對人體有害。因此，近年來微生物學(xué)家開始嘗試用微生物制劑來抑制食物的腐敗，微生物制劑是某些微生物產(chǎn)生的一些

2、代謝產(chǎn)物，能抑制腐敗菌的生長，而自身對人體無害。要得到這些代謝產(chǎn)物，必須要篩選一株合適的菌株。
　　本文是從腐敗的泡椒鳳爪中分離出來一株腐敗菌Pseudomonas gessardii，并通過三親結(jié)合將熒光蛋白GFP導(dǎo)入到該腐敗菌中構(gòu)建出一株工程菌PJ-9，以PJ-9作為被拮抗菌。
　　以腌豆角、腌白菜、酸菜及泡椒鳳爪作為篩選材料，將四種材料的浸泡液經(jīng)稀釋分別在LB和MRS兩種培養(yǎng)基上涂布。PJ-9菌經(jīng)稀釋后吸取適量的菌夜加

3、入LB培養(yǎng)基中充分混合并倒平板。采用點種法，將四種材料培養(yǎng)出的菌用滅菌的牙簽點種在混有PJ-9菌的LB平板上。根據(jù)是否產(chǎn)生押菌圈共篩選得到16株，其中從腌豆角中篩選出5株，腌白菜2株，酸菜6株，泡椒鳳爪3株。通過進(jìn)一步的復(fù)篩，然后根據(jù)抑菌圈的大小以及抑菌時間的長短，篩出一株拮抗菌作為研究的對象JK-3。擴(kuò)增出JK-3的16s序列，并構(gòu)建系統(tǒng)發(fā)育樹，并通過生理生化實驗確定為魏斯氏菌屬，為G+，對PJ-9的平均抑菌半徑為0.623cm。