“甘飛保肝注射液”的制備、質(zhì)量標準及對小鼠保肝作用研究.pdf

1、肝臟是各種營養(yǎng)物質(zhì)代謝和解毒中心，肝損傷是以各型肝炎病毒導致最為常見，其次是酒精性肝病，某些化學品也有較強的引起肝損傷的作用。鎘可通過呼吸道、消化道進入機體，造成嚴重的肝損傷。保護肝臟的藥物很多，而中藥及其提取物的應用也越來越廣泛，代表物有甘草酸二銨和水飛薊賓，主要功能是從清除活性氧、對抗脂質(zhì)過氧化，維持細胞膜的流動性、保護肝細胞膜、促進肝細胞修復、再生，從而起抗肝纖維化作用。研究表明，將其制備成磷脂復合物可有效提高其體內(nèi)吸收，顯著地改

2、善生物有效性。
　　本研究擬制備出甘草酸二銨和水飛薊賓的混合磷脂復合物并進行表征測試，將磷脂復合物制備成注射液并建立相關(guān)質(zhì)量標準，最后觀察注射液對小鼠的肝臟保護作用。
　　實驗選取大豆磷脂作輔料，丙酮作溶劑制備出甘草酸二銨和水飛薊賓的復方磷脂復合物。采取差示掃描量熱法(DSC)、紫外分光光度法(UV)、紅外光譜分析(IR)、透射電鏡(TEM)、激光粒度分析儀對磷脂復合物進行表征測試，并將復合物制備成注射液。DSC圖顯示，復合

3、物的相變溫度稍降低，物理混合物的相變溫度則出現(xiàn)重疊，但相變溫度的范圍并無明顯改變;UV圖顯示大豆磷脂在200～400 nm波長區(qū)無吸收峰，水飛薊賓、甘草酸二銨、物理混合物、磷脂復合物的紫外圖譜形狀類似，吸收峰均在240nm處;IR顯示物理混合物與磷脂復合物特征峰出現(xiàn)差異證明了復合物并不是磷脂與水飛薊賓和甘草酸二銨簡單的物理混合;TEM圖顯示磷脂復合物為形狀規(guī)整的囊泡;粒徑結(jié)果表明所制備的磷脂復合物粒徑在100～120nm較多，平均粒徑達

4、到113.6nm，從60nm～160nm范圍呈正態(tài)分布。
　　對所制備的注射液進行顏色、pH、澄明度、無菌等項目檢查，采用高效液相色譜(HPLC)對注射液的有效成分的含量進行測定，并對注射液的穩(wěn)定性進行了實驗研究。結(jié)果顯示，所制備注射液顏色呈棕黃色，pH為6.52±0.15(RSD=0.96，n=5)，注射液經(jīng)澄明度測定儀和無菌檢查均合格;HPLC圖可見甘草酸二銨對照品保留時間10.2min左右，水飛薊賓的保留時間20.1 min

5、左右，而磷脂在這兩個位置無峰出現(xiàn)，并且基線平穩(wěn);甘草酸二銨標準曲線回歸方程為Y=54894.62X-75.33，r=0.99995(n=5)，水飛薊賓的線性回歸方程為Y=820326.52X-98626.53 r=0.99992(n=5);精密度實驗結(jié)果顯示，甘草酸二銨對照品峰面積積分值RSD為0.86％，水飛薊賓對照品峰面積積分值RSD為1.12％，重現(xiàn)性結(jié)果顯示，注射液的甘草酸二銨和水飛薊賓RSD分別為0.94％和0.89％，回收率

6、實驗結(jié)果顯示，甘草酸二銨和水飛薊賓的回收率分別達到96.42％和97.35％，RSD分別為1.05％和0.92％;含量測定結(jié)果顯示，三批次注射液甘草酸二銨含量分別達到96.54％、96.21％和97.05％，而水飛薊賓分別達到97.06％、97.25％和96.87;穩(wěn)定性實驗結(jié)果表明，在高溫和強光照射后可見異物沒有發(fā)生顯著變化。放置6個月后，磷脂復合物水針劑未發(fā)生明顯變化。
　　實驗選取昆明種小鼠120只，雌雄各半。隨機分6組，組

7、Ⅰ甘草酸二銨，組Ⅱ水飛薊賓，組Ⅲ甘草酸二銨和水飛薊賓物理混合物，組Ⅳ“甘飛保肝注射液”，組Ⅴ為陰性對照，組Ⅵ為造模不治療組。Ⅰ、Ⅱ、Ⅲ、Ⅳ組腹腔注射，按40mg/kg體重給藥，連續(xù)給藥5d，1次/d。Ⅴ、Ⅵ組同法注射生理鹽水，于末次給藥后1h，除陰性對照組腹腔注射等體積的生理鹽水外，其余5組均予以3.5mg/kg腹腔注射CdCl2溶液。染鎘24h后，將所有小鼠處死，摘取小鼠肝臟，制備肝組織勻漿，離心取上清液進行GSH-Px、SOD、CA

8、T、MDA含量測定，實驗所得數(shù)據(jù)用SPSS17.0進行差異性分析，以均數(shù)±標準差表示。結(jié)果顯示單純?nèi)炬k組，組織內(nèi)SOD、GSH-Px及CAT活性較陰性對照組下降，MDA升高。水飛薊賓、甘草酸二銨、物理混合物和“甘飛保肝注射液”均可增加染鎘小鼠的肝組織中SOD、GSH-Px及CAT的活性，并抑制其MDA的生成。
　　以上實驗結(jié)果說明:DSC、UV、IR證明了磷脂復合物的形成，磷脂和藥物之間不發(fā)生化學反應，磷脂復合物并不是磷脂與水飛薊