漆酶產生菌的分離及其在山核桃蒲殼資源化利用中的應用.pdf

1、山核桃蒲殼是山核桃加工產業(yè)中的廢棄物,木質纖維素含量高,微生物難以利用,大量堆置在山核桃產地,嚴重污染當?shù)丨h(huán)境。
　　利用愈創(chuàng)木酚平板顯色,篩選到一株能在蒲殼中生長良好且漆酶活性高的菌株D2,經形態(tài)學和分子生物學分析,確定該菌株屬于多孔菌科栓菌屬,命名為毛栓菌D2。對毛栓菌D2的液態(tài)發(fā)酵產漆酶的條件進行了探討,得到的較優(yōu)培養(yǎng)基為:5％玉米淀粉,1%蛋白胨,0.05%MgSO4,0.1%KH2PO4,0.02%Na2HPO4,0.5

2、mmol/l CuSO4·5H2O;培養(yǎng)條件為:25℃,初始pH6.0,裝液量10ml/100ml。在此培養(yǎng)條件下,該菌生長迅速,漆酶活性在6 d時達到最高,為5572U/l。
　　為提高毛栓菌D2漆酶生產效率,考察了以蒲殼為基質的固態(tài)發(fā)酵條件,對添加不同碳源、氮源、C/N、蒲殼含量、含水量、pH、溫度、促進劑等對漆酶產量進行分析,研究發(fā)現(xiàn)蒲殼是毛栓菌D2生長的良好載體,能促進漆酶合成。毛栓菌D2固態(tài)發(fā)酵產漆酶的培養(yǎng)基組成為玉米粉

3、、菜籽餅和蒲殼,三者的含量分別為24%、36%、40%。評估了不同濃度的愈創(chuàng)木酚、沒食子酸、吐溫80和CuSO4·5H2O等對毛栓菌D2固態(tài)發(fā)酵產漆酶的影響,結果發(fā)現(xiàn)只有0.05%CuSO4·5H2O能刺激漆酶的合成。其他的培養(yǎng)條件如下:培養(yǎng)基含水量為60%,30℃,pH自然,接種1%培養(yǎng)3d的麩皮接種體。在此培養(yǎng)條件下,毛栓菌D2在6d時漆酶活力最高,達到252.439U/gds(ds指dry substrate)。
　　對毛栓

4、菌D2固態(tài)發(fā)酵的漆酶性質進行了研究,該菌漆酶的最適反應pH為3.5,最適反應溫度為60℃;漆酶在pH為3.0到7.0的范圍內穩(wěn)定性良好,在40℃以下較穩(wěn)定;考察了Ca2+、Cu2+、Mg2+、Mn2+、Na+、Fe3+、Fe2+、K+、Ba2+、Pb2+、EDTA、SDS對漆酶活性的影響,其中Ca2+、Cu2+、Mg2+對漆酶活性有明顯的激活作用,實驗中的其它金屬離子及抑制劑對漆酶酶活有不同程度的抑制作用。
　　對毛栓菌D2生物轉

5、化山核桃蒲殼進行了研究,確定最適培養(yǎng)基組成為(w/w):蒲殼與菜籽餅以9:1的比例混合,添加的CuSO4·5H2O終濃度為0.05%,培養(yǎng)基的含水量為60%。適宜的固態(tài)培養(yǎng)條件為:培養(yǎng)基初始pH6.0,30℃,接種量為1%。在上述培養(yǎng)條件下,展開了毛栓菌D2對山核桃蒲殼生物轉化過程的研究,結果發(fā)現(xiàn),發(fā)酵26d的過程中,培養(yǎng)基中含水量從60%逐漸降到11.5%,培養(yǎng)基的pH維持在6.0左右,4d時漆酶活力最大為218.393U/gds,纖