高、低劑量率γ線照射對(duì)哺乳類細(xì)胞生長(zhǎng)存活及DNA損傷修復(fù)的影響.pdf

1、目的：通過高劑量率(high-dose-rate，or acute，1.0Gy/min)、低劑量率(low-dose rate，or chronic，0.347mGy/min)γ線對(duì)哺乳類細(xì)胞的照射，研究照射后哺乳類細(xì)胞的生長(zhǎng)存活情況，探討γ線引起的細(xì)胞損傷修復(fù)機(jī)制。
　　 方法：⑴采用Western Blot方法從蛋白水平檢測(cè)DNA損傷調(diào)控因子P53、P21、磷酸化共濟(jì)失調(diào)-毛細(xì)血管擴(kuò)張癥致病基因(Ataxia-Telangi

2、ectasia mutated，ATM)在本研究所用細(xì)胞中的表達(dá)，為下一步研究提供可行性。⑵血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)法測(cè)定低劑量率照射對(duì)細(xì)胞生長(zhǎng)曲線的影響；克隆形成率測(cè)定指數(shù)增長(zhǎng)期及密集抑制期細(xì)胞高、低劑量率照射下的存活率。⑶采用免疫熒光染色法檢測(cè)有無ATM抑制劑及DNA依賴性蛋白激(DNA-dependent protein kinase，catalytic subunit，DNA-PKcs)抑制劑作用于密集抑制的穩(wěn)相細(xì)胞照射后DNA雙鏈斷裂

3、(DNA double-strand breaks，DSBs)的生物標(biāo)記物γ-H2AX的免疫熒光表達(dá)。
　　 結(jié)果：①Western Blot結(jié)果顯示：高劑量率(1.0Gy/min)5.0Gy照射后，三種哺乳類細(xì)胞中，磷酸化ATM均有表達(dá)，磷酸化P53、P21也有一定程度的誘導(dǎo)表達(dá)。②低劑量率照射組的HE-4細(xì)胞及MRC5-hTERT細(xì)胞相比較與未照射組生長(zhǎng)速度減慢，而C3H10T1/2細(xì)胞沒有明顯變化；③指數(shù)增長(zhǎng)期期細(xì)胞及密集

4、抑制狀態(tài)下高劑量率(1.0Gy/min)照射的細(xì)胞存活率均低于低劑量率(0.347mGy/min)照射。④高劑量率(1.0Gy/min)γ線照射密集抑制的穩(wěn)相細(xì)胞后，隨著培養(yǎng)時(shí)間的延長(zhǎng)，細(xì)胞的存活率增高。⑤γ-H2AX免疫熒光染色提示ATM抑制劑及DNA-PKcs抑制劑處理后的密集抑制狀態(tài)的細(xì)胞在高、低劑量率照射下的DSBs均高于對(duì)照組。
　　 結(jié)論：⑴磷酸化ATM、磷酸化P53、P21在照射后的細(xì)胞中均有表達(dá)。⑵高劑量率與低劑