瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)的高密度培養(yǎng)以及S層蛋白質(zhì)提取條件的優(yōu)化.pdf

1、瑞士乳桿菌(Lactobacillus helveticus)，是乳酸桿菌屬內(nèi)的一種產(chǎn)乳酸的桿狀細菌。越來越多的研究表明瑞士乳桿菌具有健康促進作用，例如能夠抑制腸道中病菌侵染、提高對病原菌的抗病力、調(diào)節(jié)機體免疫能力和改善胃腸道正常菌群等益生作用。瑞士乳桿菌細胞表面覆蓋了一層由單個蛋白亞基或糖蛋白組成的單層晶格結(jié)構(gòu)。隨著對S層蛋白質(zhì)的結(jié)構(gòu)、化學、遺傳和裝配的研究，越來越多的信息表明其在微載體、診斷裝置、生物傳感器、疫苗以及標記和輸送系統(tǒng)上

2、有廣泛的應(yīng)用前景。
　　本論文首先以乳酸菌培養(yǎng)基(MRS)為基礎(chǔ)，針對MRS培養(yǎng)基中的碳源、氮源篩選出最適碳、氮源，再對培養(yǎng)基中碳氮比和緩沖體系進行了優(yōu)化，探索最適合瑞士乳桿菌菌株發(fā)酵的培養(yǎng)基成份;然后對發(fā)酵溫度、接種量、培養(yǎng)方式和發(fā)酵pH值進行了優(yōu)化，確定了瑞士乳桿菌的最佳培養(yǎng)條件;最后對瑞士乳桿菌的S層蛋白質(zhì)提取條件中的菌體收獲時間進行了優(yōu)化。經(jīng)優(yōu)化后的發(fā)酵液中的活菌數(shù)和提取的S層蛋白質(zhì)的量都有所提高。本論文的主要結(jié)果如下:<

3、br>　　1、在搖瓶發(fā)酵實驗中通過單因子實驗對瑞士乳桿菌培養(yǎng)基的主要成份進行優(yōu)化，結(jié)果發(fā)現(xiàn)酵母粉和葡萄糖的促進菌體生長的效果分別明顯高于其他碳、氮源，然后通過調(diào)節(jié)C/N比值使之獲得較好的增菌效果;乙酸鈉、磷酸氫二鈉和磷酸氫二鉀作為唯一緩沖鹽成份時比其他緩沖鹽的增菌效果較好，然后對這三種緩沖鹽進行正交實驗，確定了優(yōu)化培養(yǎng)基中的緩沖鹽成份。優(yōu)化后的培養(yǎng)基成份為:酵母粉14.1 g/L，乙酸鈉8.12 g/L，磷酸氫二鈉9.94 g/L，磷酸

4、氫二鉀18.61g/L，吐溫801.0 g/L，牛肉膏10.0g/L，葡萄糖15.0 g/L，MgSO4·7H2O0.2 g/L，MnSO4·H2O0.05 g/L?；罹鷶?shù)到達9.4×108 CFU/mL，比優(yōu)化前提高了大約2.7倍。
　　2、在優(yōu)化的最佳培養(yǎng)基基礎(chǔ)上，通過單因子實驗確定了瑞士乳桿菌在搖瓶中最佳發(fā)酵條件為:發(fā)酵溫度37℃，接種量5％，靜置發(fā)酵;然后在此基礎(chǔ)上對發(fā)酵罐的發(fā)酵條件進行了優(yōu)化，確定為:發(fā)酵罐溫度37℃，接