外源水楊酸和氯化鈣對番茄抗旱性及差異基因表達(dá)的影響.pdf

1、番茄的營養(yǎng)價值，十分豐富。對于全世界而言，也是最重要的果蔬作物之一，在我國蔬菜產(chǎn)業(yè)中，也是地位超群。然而差不多所有的栽培番茄的品種，在全生育期，尤其是發(fā)芽期和幼苗期，都對干旱產(chǎn)生了不同程度的敏感。是以，在干旱脅迫時，研究番茄的形態(tài)結(jié)構(gòu)，測定其生理、生化指標(biāo)，從分子的角度上分析其作用機(jī)理都是十分必要的。為解決干旱對番茄栽培生產(chǎn)等造成的影響，提供了重要的理論基礎(chǔ)和現(xiàn)實(shí)依據(jù)。但是目前關(guān)于番茄耐旱性的研究，基本都停留在形態(tài)結(jié)構(gòu)和生理生化指標(biāo)的分

2、析上，對于分子層面上的，關(guān)于番茄抗旱的研究仍是比較少。
　　本研究利用水楊酸、氯化鈣調(diào)節(jié)植物對于干旱脅迫的響應(yīng)，通過外施水楊酸、氯化鈣，研究觀察番茄幼苗的表型結(jié)構(gòu)，測定分析生理生化的指標(biāo)，對干旱脅迫下的番茄幼苗進(jìn)行最適抗旱濃度的篩選。同時利用cDNA-AFLP技術(shù)研究干旱脅迫下最佳濃度的水楊酸、氯化鈣誘導(dǎo)番茄幼苗發(fā)育過程中的差異表達(dá)基因，并在此基礎(chǔ)上對差異片段進(jìn)行分離、測序分析，以期從分子水平闡明外源水楊酸和氯化鈣在加強(qiáng)番茄抗旱應(yīng)

3、答過程中的作用，為深入了解番茄抗旱的應(yīng)答機(jī)制奠定基礎(chǔ)，為番茄高產(chǎn)、優(yōu)質(zhì)栽培提供科學(xué)理論依據(jù)，主要研究結(jié)果有:
　　(1)采用適當(dāng)濃度的SA和CaCl2，對番茄幼苗進(jìn)行外源噴施，有效地緩解了番茄葉片RWC的降低，降低了相對電導(dǎo)率和MDA含量，同時，增加了番茄葉片相對葉綠素、Pro和可溶性蛋白的含量，促使SOD、CAT、POD三種保護(hù)酶活性增強(qiáng)，提高番茄幼苗的抗旱性。在兩種藥物的所有的不同濃度的處理中，以0.3 mmol·L-1的SA

4、和10 mmol·L-1的CaCl2處理對提高番茄幼苗抗旱性效果更佳，且綜合分析比較，0.3 mmol· L-1的SA效果更為突出。
　　(2)根據(jù)對生理指標(biāo)的測定結(jié)果分析，同時結(jié)合對表型的觀察研究，得到了幾個關(guān)鍵的干旱時間點(diǎn)，分別為12h、24 h、36 h、2d、3d、5d、7d。這些時間點(diǎn)也為分子實(shí)驗(yàn)樣品采集及后期基因表達(dá)模式分析提供依據(jù)。
　　(3)對番茄品種“東農(nóng)11537”篩選出來的最佳抗旱濃度0.3 mmol·

5、 L-1的SA和10 mmol·L-1的CaCl2進(jìn)行了干旱脅迫處理和對照處理，具體分別為正常對照(CK1)、干旱對照(CK2)、氯化鈣最佳濃度處理(C10)、正常澆水且噴施10 mmol·L-1CaCl2的對照處理(CKC)、水楊酸的最佳濃度處理(S0.3)、正常澆水且噴施0.3 mmol·L-1SA的對照處理(CKS)。對以上6種樣品的不同時間點(diǎn)的總RNA進(jìn)行了cDNA-AFLP技術(shù)分析，用EcoRⅠ、MseⅠ這兩種限制性內(nèi)切酶進(jìn)行

6、雙酶切，選擇性擴(kuò)增共采用了256對引物組合，本試驗(yàn)篩選得到213條差異表達(dá)轉(zhuǎn)錄衍生片段(TDFs)，將得到的TDFs進(jìn)行二次擴(kuò)增、克隆以及測序，獲得有效片段為106條。
　　(4)將得到的106條差異片段在NCBI上進(jìn)行nucleotide blast和blastx同源序列比對，去掉沒有比對結(jié)果的片段，最終成功獲得了90條差異片段，并將獲得的90條TDFs進(jìn)行分類，主要包括未知功能基因、轉(zhuǎn)錄因子、轉(zhuǎn)移運(yùn)輸、遺傳信息處理、信號轉(zhuǎn)導(dǎo)等