納他霉素產(chǎn)生菌的選育及其胞外調(diào)控的研究.pdf

1、隨著人們對(duì)食品安全意識(shí)的提高，人們對(duì)食品防腐劑的使用更加重視和謹(jǐn)慎，納他霉素(Natamycin)是由鏈霉菌發(fā)酵產(chǎn)生的次級(jí)代謝產(chǎn)物，是一種高效、廣譜、安全的二十六元多烯大環(huán)內(nèi)酯類真菌抑制劑，作為新型的生物防腐劑被廣泛的應(yīng)用于食品與醫(yī)藥領(lǐng)域中。天然生物防腐劑納他霉素的市場(chǎng)需求逐漸變大，但目前納他霉素發(fā)酵水平較低，導(dǎo)致成本太高。國(guó)內(nèi)外對(duì)提高納他霉素產(chǎn)量的研究大多側(cè)重于菌種選育和發(fā)酵工藝優(yōu)化方面，但目前納他霉素產(chǎn)量還是比較低，價(jià)格較高。因此，

2、為提高納他霉素的產(chǎn)量探索一些新的方法和途徑具有重要的意義。本文通過(guò)復(fù)合誘變篩選出一株納他霉素高產(chǎn)菌株，并對(duì)納塔爾鏈霉菌進(jìn)行胞外調(diào)控研究。
　　以atcc37448(納塔爾鏈霉菌4.3505）為出發(fā)菌株，進(jìn)行紫外和微波復(fù)合誘變。通過(guò)實(shí)驗(yàn)確定最佳的紫外誘變條件為：紫外燈管30W，距離25cm，照射時(shí)間120s；最佳的微波誘變條件為：最大輸出功率800W，額定頻率2450MHz，處理時(shí)間50s。在此條件下，篩選出一株高產(chǎn)菌株M-65，其

3、發(fā)酵生產(chǎn)納他霉素的產(chǎn)量達(dá)到1.647g/L，較出發(fā)菌株的產(chǎn)量提高了28.56％。
　　分別向納塔爾鏈霉菌發(fā)酵培養(yǎng)基中添加乙酸鈉、丙酸鈉、丁酸鈉、乙醇、正丙醇和正丁醇等不同前體，研究了其對(duì)納他霉素產(chǎn)量的影響，發(fā)現(xiàn)這些前體均能有效的提高納他霉素的產(chǎn)量，其中丙酸鈉和乙酸鈉的作用效果較好。然后通過(guò)對(duì)添加工藝的優(yōu)化，確定丙酸鈉和乙酸鈉的最佳添加量均為0.6%，最佳的添加時(shí)間均為接種后24h時(shí)；乙酸鈉和丙酸鈉混合添加時(shí)的最適比例為7:1，使納

4、他霉素的產(chǎn)量達(dá)到3.174g/L，較對(duì)照組提高了92.71%。
　　通過(guò)對(duì)黑曲霉、產(chǎn)黃青霉、米曲霉、釀酒酵母等四種真菌的細(xì)胞誘導(dǎo)子和代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)子進(jìn)行對(duì)比篩選，得出產(chǎn)黃青霉代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)子對(duì)納他霉素生物合成的促進(jìn)效果最強(qiáng)，使納他霉素產(chǎn)量達(dá)到2.871g/L，較原始產(chǎn)量(1.647g/L)提高了74.32%。接著對(duì)誘導(dǎo)條件進(jìn)行優(yōu)化，得到最佳誘導(dǎo)條件：產(chǎn)黃青霉代謝產(chǎn)物誘導(dǎo)子的最優(yōu)培養(yǎng)時(shí)間為2d，在納塔爾鏈霉菌發(fā)酵24h時(shí)加入，發(fā)酵至12