3D打印多孔復合支架的生物相容性研究.pdf

1、本文主要從以下幾個方面進行論述：
　　第一部分 后續(xù)支架上的種子細胞的實驗研究
　　目的：
　　從 SD大鼠體內(nèi)成功分離骨髓間充質干細胞（BMSCs），并檢測細胞多向分化的能力以及其表面上的相應 CD分子表達，為后續(xù)的支架上種子細胞提供明確的研究背景。
　　方法：
　　1.利用全骨髓貼壁法分離、培養(yǎng)、純化大鼠骨髓間充質干細胞。
　　2.將骨髓間充質干細胞進行成骨，成脂兩個方向的分化誘導。
　　3

2、.利用流式細胞術檢測BMSCs表面的相應CD分子表達。
　　結果：
　　1.在體外進行分離培養(yǎng)的骨髓間充質干細胞形態(tài)主要為梭形，排列似放射狀。
　　2.成骨分化的茜素紅染色，堿性磷酸酶ALP染色雙陽性；成脂分化的油紅O染色陽性。
　　3.流式細胞術檢測表明第3代骨髓間充質干細胞CD44和CD90雙陽性率高達93.9％。
　　結論：
　　本實驗能為后續(xù)支架上的種子細胞提供明確的研究背景。
　　第二

3、部分 3D多孔復合支架的制備及其生物相容性檢測
　　目的：
　　使用3D打印機制備由PLA/HA復合材料組成的多孔支架，通過體外體內(nèi)實驗檢測其生物相容性。
　　方法：
　　1.使用3D打印機制備PLA/HA復合物多孔支架，測量支架孔隙率，并利用Micro CT和SEM觀察支架結構。
　　2.參照醫(yī)療器械生物學評價標準（GB/T16886）提取支架浸提液，根據(jù)美國藥典五級毒性評級標準運用細胞計數(shù)試劑盒CCK-

4、8檢測支架浸提液的細胞毒性。
　　3.采用細胞計數(shù)試劑盒CCK-8實驗評價大鼠骨髓間充質干細胞與支架復合培養(yǎng)的黏附增殖情況。
　　4.選用熒光顯微鏡、掃描電子顯微鏡觀察細胞與支架共培養(yǎng)之后其形態(tài)學的變化。
　　5.通過SD大鼠皮下植入支架試驗術后1、3、4w取組織做切片HE染色，觀察支架周圍炎性細胞以及新生血管，成纖維細胞的情況
　　結果：
　　1.成功制備了3D復合多孔支架，支架孔隙率為0.6763±0.

5、03592，Micro CT掃描及SEM掃描結果顯示支架孔徑大小統(tǒng)一，層次分明，支架內(nèi)有HA顆粒均勻分布，支架表面有大小一致的細小孔隙。
　　2.PLA/HA復合多孔支架不同濃度浸提液細胞毒級評分為0級或1級，無細胞毒性。
　　3.細胞與支架共培養(yǎng)后，支架上粘附的細胞隨著時間的延長而增加（P＜0.05）。
　　4.BMSCs在支架上黏附，增殖，遷移，顯示出良好的細胞相容性。
　　5.皮下植入支架實驗結果顯示，在植