骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞移植調(diào)節(jié)煙霧吸入性損傷炎癥反應(yīng)的實驗研究.pdf

1、目的：探討骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞的分離、培養(yǎng)、擴增及鑒定，分析移植后對兔煙霧吸入性損傷炎癥反應(yīng)及對肺損傷修復(fù)的作用并探討其可能機制。
　　 方法：首先以全骨髓培養(yǎng)法分離、體外培養(yǎng)及擴增成兔MSCs，采用MTT方法測定培養(yǎng)細(xì)胞生長曲線，并用流式細(xì)胞術(shù)鑒定MSCs抗原表達(dá)。建立煙霧吸入性損傷模型，傷后立即進(jìn)行MSCs移植。將72只健康新西蘭大耳白兔隨機分為正常對照組(C，n=8)：經(jīng)耳緣靜脈注入10mlPBS；煙霧吸入性損傷組(S，n=3

2、2)：傷后立即經(jīng)耳緣靜脈注入10mlPBS；煙霧吸入性損傷+MSCs移植組(M，n=32)：傷后立即經(jīng)耳緣靜脈注入10ml含有第三代MSCs(1.0×107)的PBS。S、M組動物均在致傷前及致傷后2h、4h、6h經(jīng)耳緣靜脈采血離心分離血漿封裝后凍存于-80℃冰箱中集中檢測血漿細(xì)胞因子。C組采血作對照。采用酶聯(lián)免疫吸附(ELISA)方法檢測S組及M組致傷后2h、4h、6h(每個時間點各8只)及C組兔的血漿及肺組織勻漿液中TNF-α、IL

3、-1β、IL-6及IL-10的含量。S、M組動物均在致傷前及致傷后2h、4h、6h及24h分別活殺動物(每個時間點各8只)。分離右肺中葉用于測定肺水質(zhì)量分?jǐn)?shù)；右肺下葉10％甲醛固定用于病理學(xué)觀察。分離左肺制備勻漿。C組取肺組織測定濕/干比值和病理學(xué)觀察作為對照。
　　 結(jié)果：1、全骨髓培養(yǎng)法培養(yǎng)的原代MSCs接種4天后形態(tài)均勻成梭形，生長增殖迅速，7-8天MSCs融合接近80％，傳代培養(yǎng)生長良好。經(jīng)流式細(xì)胞術(shù)鑒定，CD34(-)

4、、CD45(-)、CD44(+)、CD105(+)，證明所培養(yǎng)的細(xì)胞為較純的MSCs。2、煙霧吸入性損傷后2h、4h、6h，外周血中各炎癥因子含量M組與相應(yīng)S組對應(yīng)時間點值相比均有顯著差異(P<0.05)。在肺組織勻漿液中，M組與S組對應(yīng)各個時間點相比，各促炎癥因子含量均顯著降低(P<0.05)，而抗炎因子IL-10僅在4h、6h顯著升高(P<0.05)，在傷后2h無顯著差異(P>0.05)。3、病理學(xué)觀察：大體觀察：從顏色、外觀、包膜

5、緊張度、充血出血情況、滲出物等方面看，各時間點M組較S組顯著好轉(zhuǎn)，C組未見異常。組織病理學(xué)觀察：從充血出血情況、肺泡隔情況、肺水腫、脫落上皮細(xì)胞、炎癥細(xì)胞浸潤等方面看，各時間點M組較S組顯著好轉(zhuǎn)，C組結(jié)構(gòu)正常。
　　 結(jié)論：1、MSCs移植能降低煙霧吸入性損傷早期促炎因子水平，升高抗炎因子水平，改善全身炎癥反應(yīng)，對煙霧吸入性損傷肺組織具有一定的保護(hù)作用。2、經(jīng)過骨髓間充質(zhì)干細(xì)胞治療干預(yù)的煙霧吸入性損傷兔病理改變有所減輕。3、免疫