HrpN-,Ea-誘導(dǎo)擬南芥對(duì)桃蚜的抗性及參與作用的轉(zhuǎn)錄因子鑒定.pdf

1、用刺吸行為電圖（EPG）技術(shù)記錄了桃蚜在HrpNEa或無活性蛋白EVP處理的擬南芥野生型Col-0、乙烯通路突變體ein2-1，ein5-1上的刺吸取食波型，比較了桃蚜在不同處理植物上的驅(qū)避行為。EVP處理與HrpNEa處理擬南芥后，桃蚜在ein2-1中取食時(shí)，反映被動(dòng)取食行為的E波次數(shù)和平均周期無明顯差別，而在Col-0與ein5-1中，EVP與HrpNEa處理均有明顯差別，且驅(qū)避數(shù)據(jù)與EPG結(jié)果一致，即HrpNEa可以通過激活乙烯信

2、號(hào)通路重要因子EIN2誘導(dǎo)植物抗蟲。根據(jù)原位雜交和RT-PCR研究的結(jié)果，HrpNEa處理可誘導(dǎo)韌皮部相關(guān)蛋白基因AtPP2在韌皮部表達(dá)，還可誘導(dǎo)Col-0而非ein2-1沉積胼胝質(zhì)。因此，HrpNEa可以誘導(dǎo)韌皮部防衛(wèi)反應(yīng)，而乙烯信號(hào)傳導(dǎo)因子EIN2在這一過程中起重要作用。
　　 研究了轉(zhuǎn)錄因子調(diào)控HrpNEa誘導(dǎo)抗蟲的作用。用HrpNEa處理野生型Col-0，采用RT-PCR方法初步篩選37個(gè)轉(zhuǎn)錄因子中受HrpNEa誘導(dǎo)表達(dá)

3、被上調(diào)的轉(zhuǎn)錄因子，選取部分基因用Northern方法進(jìn)行驗(yàn)證。進(jìn)一步用Realtime RT-PCR方法確證轉(zhuǎn)錄因子被誘導(dǎo)的情況，結(jié)果顯示包括AtMYB44在內(nèi)的9個(gè)轉(zhuǎn)錄因子基因其表達(dá)能被顯著誘導(dǎo)。觀察了37個(gè)轉(zhuǎn)錄因子突變體對(duì)蚜蟲驅(qū)避、繁殖及對(duì)接種病原細(xì)菌Pseudomonassyringae pv.tomato DC3000的反應(yīng)。擬南芥突變體atmyb44能抑制HrpNEa誘導(dǎo)植物防衛(wèi)反應(yīng)的作用，抵抗蚜蟲取食與繁殖以及抵抗P.syr

4、ingae pv.tomato DC3000侵染的能力都不能被誘導(dǎo)，說明AtMYB44可能參與調(diào)控HrpNEa誘導(dǎo)的擬南芥抗蟲性和抗病性。
　　 將擬南芥AtMYB44基因連入植物表達(dá)載體pBI121中，用PCR的方法引入9個(gè)組氨酸標(biāo)記，并用AtMYB44基因的2000bp啟動(dòng)子替換pBI121上的35S啟動(dòng)子，構(gòu)建了植物重組表達(dá)質(zhì)粒pBI121-/P2000/AtMYB44（his9），由農(nóng)桿菌Agrobacterium tu

5、mefaciens菌株EHA105介導(dǎo)，轉(zhuǎn)化擬南芥生態(tài)型Col-0。獲得了抗卡那霉素的轉(zhuǎn)基因純合過量表達(dá)擬南芥植株，經(jīng)PCR，RT-PCR，初步觀察檢測，證明AtMYB44基因已整合到擬南芥基因組中。
　　 以上研究結(jié)果有兩點(diǎn)創(chuàng)新：（1）韌皮部防衛(wèi)反應(yīng)在HrpNEa誘導(dǎo)擬南芥對(duì)桃蚜的抗性發(fā)生過程中起重要作用；（2）AtMYB44在HrpNEa誘導(dǎo)擬南芥抵抗桃蚜的過程中起重要作用。對(duì)韌皮部防衛(wèi)反應(yīng)與AtMYB44之間在功能上的關(guān)系