基于卟啉的新型電致化學(xué)發(fā)光生物傳感器及其核酸蛋白分析應(yīng)用研究.pdf

1、電致化學(xué)發(fā)光(electrochemiluminescence，ECL)技術(shù)具有較好的可控性、選擇性、重現(xiàn)性及較高的檢測(cè)靈敏度，主要應(yīng)用于臨床、農(nóng)業(yè)、環(huán)境和生物檢測(cè)等領(lǐng)域。
　　核酸是遺傳信息的攜帶者，在生命發(fā)展過(guò)程中具有重要意義。核酸適配體是能夠特異性結(jié)合某些小分子或蛋白的具有特殊結(jié)構(gòu)的核酸。核酸適配體在參與構(gòu)建生物傳感體系用于檢測(cè)某些特定蛋白或小分子的過(guò)程中發(fā)揮著重要的作用。卟啉(porphyrin)及金屬卟啉(metallo

2、porphyrin)因具有高度共軛的雜環(huán)結(jié)構(gòu)而具備良好的光電效應(yīng)、電子傳輸和分離能力及電致化學(xué)發(fā)光活性。本論文主要研究基于卟啉的電致化學(xué)發(fā)光生物傳感器并研究其在核酸、蛋白質(zhì)檢測(cè)方面的應(yīng)用。
　　1.基于卟啉超分子納米團(tuán)簇電致化學(xué)發(fā)光的一種通用的DNA傳感策略
　　本實(shí)驗(yàn)以H7N9病毒H7亞型的引物序列為檢測(cè)對(duì)象，用自行設(shè)計(jì)的發(fā)卡結(jié)構(gòu)DNA特異性捕獲目標(biāo)DNA，發(fā)卡結(jié)構(gòu)打開(kāi)后暴露的末端修飾基團(tuán)為傳感體系構(gòu)建提供可能。根據(jù)金屬卟

3、啉可參與軸向配位的特點(diǎn)，利用富勒烯苯胺咪唑復(fù)合物富集ZnTPP合成了一種卟啉超分子納米團(tuán)簇C60-ZnTPP復(fù)合物，并作為電致化學(xué)發(fā)光的信號(hào)分子。我們利用環(huán)糊精分子的中空桶狀結(jié)構(gòu)及其常作為物質(zhì)包絡(luò)主體的特性，將電致化學(xué)發(fā)光體組裝并固定在cDNA末端，構(gòu)建了基于電致化學(xué)發(fā)光的通用DNA傳感策略。經(jīng)電致化學(xué)發(fā)光分析檢測(cè)，本實(shí)驗(yàn)發(fā)現(xiàn)，構(gòu)建的電致化學(xué)發(fā)光生物傳感體系能夠很好地檢測(cè)到目標(biāo)DNA，檢測(cè)下限可達(dá)1.0pM。該體系使用通用、簡(jiǎn)易的信號(hào)標(biāo)

4、記、放大手段和DNA檢測(cè)策略，對(duì)核酸的靈敏度高、重現(xiàn)性好、檢測(cè)下限低、線性范圍寬、穩(wěn)定性良好，具有廣闊的應(yīng)用前景。
　　2.以溶菌酶和血紅素共觸發(fā)的適配體功能化量子點(diǎn)的特異性電致化學(xué)發(fā)光檢測(cè)平臺(tái)
　　本工作基于血紅素/G四鏈體復(fù)合物設(shè)計(jì)并構(gòu)建了一種高效快速的電致化學(xué)發(fā)光平臺(tái)用于檢測(cè)溶菌酶蛋白。利用吸附在殼聚糖上的納米金來(lái)固定末端為巰基的發(fā)卡結(jié)構(gòu)核酸適配體，該發(fā)卡結(jié)構(gòu)DNA由溶菌酶適配體和G四鏈體序列組成。在血紅素和溶菌酶同時(shí)