吡唑硫磷雌激素效應(yīng)及其斑馬魚胚胎發(fā)育毒性對映體選擇性.pdf

1、近年來，典型手性有機磷殺蟲劑吡唑硫磷的環(huán)境行為及急性毒性報道較多，但是關(guān)于其對魚類等高等脊椎生物的水生毒性及內(nèi)分泌干擾性的研究較少，更缺乏針對吡唑硫磷毒性的立體選擇性差異研究。本研究運用體外重組人雌激素受體基因酵母菌并結(jié)合分子模擬方法，從分子水平上分析了吡唑硫磷的類雌激素效應(yīng)的對映體選擇性差異可能的分子機制;并以斑馬魚為實驗?zāi)Ｐ?，研究了免疫分子介導的吡唑硫磷水生發(fā)育毒性的對映體選擇性。具體研究內(nèi)容分述如下:
　　(1)引入計算機分

2、子對接技術(shù)評價有機磷農(nóng)藥的類雌激素效應(yīng)。選取10種報道有潛在雌激素活性的有機磷農(nóng)藥。通過分子對接方法研究表明:各有機磷農(nóng)藥分子與雌激素受體α(Estrogen Receptorα，ERα)配體結(jié)合域(Ligand Binding Domain，LBD)，ERβ LBD氨基酸存在不同的氫鍵作用、疏水作用和靜電作用。這10種有機磷農(nóng)藥分子與ER受體不同的相互作用是導致它們雌激素效應(yīng)差異的重要原因之一。
　　(2)采用重組人雌激素受體基

3、因酵母菌評價吡唑硫磷的雌激素效應(yīng)對映體選擇性。結(jié)果表明:吡唑硫磷對映異構(gòu)體具有對映體選擇性的類雌激素活性，R構(gòu)型顯著大于S構(gòu)型和外消旋體。分子對接結(jié)果顯示:R構(gòu)型與ERα LBD形成兩個氫鍵，S構(gòu)型與ERα LBD形成一個氫鍵;此外不同對映體與ER靜電作用和疏水作用也存在結(jié)合模式。這可能是造成吡唑硫磷類雌激素活性差異對映體選擇性的原因。
　　(3)以斑馬魚為模型生物，研究吡唑硫磷外消旋體和對映體水生發(fā)育毒性。實驗結(jié)果表明:吡唑硫磷

4、對斑馬魚幼魚-胚胎急性毒性的致死效應(yīng)大小順序為:R＞rac＞S;吡唑硫磷能夠誘導斑馬魚產(chǎn)生孵化抑制、卵黃囊水腫、心包囊水腫以及身體彎曲等多種發(fā)育異常，且R構(gòu)型致畸效應(yīng)顯著大于S構(gòu)型;吡唑硫磷對斑馬魚早期發(fā)育先天性免疫系統(tǒng)相關(guān)基因白介素(Interleukin，IL) IL-1β具有較明顯的選擇性上調(diào)作用，表現(xiàn)為R＞S。進一步，通過分子對接方法模擬表明:R/S構(gòu)型與IL-1β受體LBD結(jié)合形成氫鍵個數(shù)不同，可能是導致選擇性誘導的原因之一。