2023年全國碩士研究生考試考研英語一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁
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文檔簡介

1、研究目的:
  本研究擬通過制備人的洗滌血小板,并在TLR4/TLR2單克隆抗體阻斷前后分別給予LPS/PGN刺激,初步探討體外條件下LPS/PGN對血小板凋亡的誘導(dǎo)效應(yīng)及LPS-TLR4、PGN-TLR2通路在其中發(fā)揮的作用,為膿毒癥相關(guān)性血小板減少癥的發(fā)病機制提供基礎(chǔ)研究證據(jù),為改善膿毒癥相關(guān)性血小板減少癥患者的預(yù)后提供可能的治療靶點。
  內(nèi)容:
  第一部分:體外條件下,LPS誘導(dǎo)人血小板凋亡的研究及TLR4的

2、介導(dǎo)作用
  制備人洗滌血小板,濃度梯度組用不同濃度的LPS分別與洗滌血小板進(jìn)行體外孵育,觀察LPS對血小板凋亡的誘導(dǎo)效應(yīng)并篩選出誘導(dǎo)血小板凋亡的LPS最適濃度。TLR4單克隆抗體阻斷組以凝血酶為陽性對照,觀察TLR4單克隆抗體阻斷前后,LPS對血小板凋亡誘導(dǎo)作用的變化。
  第二部分:體外條件下,PGN誘導(dǎo)人血小板凋亡的研究及TLR2的介導(dǎo)作用
  制備人洗滌血小板,濃度梯度組用不同濃度的PGN分別與洗滌血小板進(jìn)行體

3、外孵育,觀察PGN對血小板凋亡的誘導(dǎo)效應(yīng)并篩選出誘導(dǎo)血小板凋亡的PGN最適濃度。TLR2單克隆抗體阻斷組以凝血酶為陽性對照,觀察TLR2單克隆抗體阻斷前后,PGN對血小板凋亡誘導(dǎo)作用的變化。
  方法:
  制備洗滌血小板,建立體外反應(yīng)體系,分別設(shè)置LPS/PGN濃度梯度實驗組及TLR4/TLR2單克隆抗體阻斷實驗組,以凝血酶誘導(dǎo)的血小板凋亡作為陽性對照,應(yīng)用流式細(xì)胞技術(shù)測定不同處理組血小板的PS外翻及ΔΨ去極化,應(yīng)用凋亡蛋

4、白抗體芯片法篩查血小板凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)水平,應(yīng)用蛋白印記技術(shù)檢測促凋亡蛋白Caspase-3、-8、Bax、Bak和抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)水平。
  結(jié)果:
  LPS及PGN均以濃度依賴性為特點誘導(dǎo)血小板發(fā)生PS外翻及ΔΨ去極化。凋亡蛋白抗體芯片結(jié)果顯示,在LPS及PGN刺激下,血小板多種凋亡相關(guān)蛋白的表達(dá)發(fā)生變化,主要以促凋亡蛋白的升高及抗凋亡蛋白的降低為主。Western Blot結(jié)果提示 LPS及 PGN誘導(dǎo)下

5、,血小板促凋亡蛋白 Caspase-3、-8、Bax及Bak的表達(dá)增加,抗凋亡蛋白Bcl-2的表達(dá)也呈增高趨勢。而TLR4/TLR2單克隆抗體阻斷實驗表明,LPS-TLR4/PGN-TLR2通路至少部分介導(dǎo)了LPS/PGN誘導(dǎo)的血小板凋亡的發(fā)生。
  結(jié)論:
  1. LPS及PGN均可誘導(dǎo)血小板發(fā)生凋亡,表現(xiàn)為PS外翻、ΔΨm去極化、Caspase-3活性增高、Caspase-8、Bak、Bax及Bcl-2等凋亡相關(guān)蛋白表

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