兩種四溴雙酚A類化合物抗體的制備及其生物分析方法的建立.pdf_第1頁
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文檔簡介

1、四溴雙酚A(TBBPA)是由雙酚A通過溴化等過程產(chǎn)生的,因其阻燃效果好、熱穩(wěn)定性高、制造成本低廉等優(yōu)點(diǎn),被大量用于工業(yè)生產(chǎn)和電子電器設(shè)備中。然而相關(guān)研究表明:這類化合物具有不易降解和高生物累積的特點(diǎn),可對人類及野生動物造成多器官損害。因此建立一種針對此類污染物的高效可靠的分析方法,對研究其在環(huán)境中的分布、遷移及進(jìn)行生態(tài)風(fēng)險評估具有重要的現(xiàn)實(shí)意義。
  基于此,本研究合成了TBBPA與其衍生物四溴雙酚A二羥乙基醚(TBBPA-DHE

2、E)的系列半抗原,并以相應(yīng)的半抗原為基礎(chǔ)制備出多克隆抗體,建立了一種高通量、快速的間接競爭 ELISA方法,并對相關(guān)參數(shù)進(jìn)行了優(yōu)化;同時,由于目前市場上還沒有四溴雙酚A二烯丙基醚(TBBPA-DAE)與四溴雙酚A二溴丙基醚(TBBPA-DBPE),而這兩種化合物作為TBBPA的重要衍生物,是進(jìn)行抗體交叉反應(yīng)率測定所需要的物質(zhì),因此本研究又合成了此兩種物質(zhì)的標(biāo)準(zhǔn)品。主要研究成果歸納如下:
  (1)以雙酚酸為原料,通過酯化、溴化和水

3、解等步驟得到半抗原TBBPA-D1,并通過活性酯法分別偶聯(lián)在大分子載體蛋白BSA、OVA上得到了特定的人工免疫原(TBBPA-D1-BSA)和人工包被原(TBBPA-D1-OVA)。
  (2)以苯酚和5-乙酰戊酸為原料,通過加成、酯化、溴化和水解等步驟得到半抗原TBBPA-D2,并通過活性酯法分別偶聯(lián)在大分子載體蛋白BSA、OVA上得到了特定的人工免疫原(TBBPA-D2-BSA)和人工包被原(TBBPA-D2-OVA)。

4、>  (3)以TBBPA和溴乙酸為原料,通過取代等步驟得到半抗原TBBPA-DHEE-M1,并通過活性酯法分別偶聯(lián)在大分子載體蛋白BSA、OVA上得到了特定的人工免疫原(DHEE-M1-BSA)和人工包被原(DHEE-M1-OVA)。
  (4)以TBBPA為原料,通過消去、加成等反應(yīng)得到TBBPA-DAE和TBBPA-DBPE兩種標(biāo)準(zhǔn)品,產(chǎn)物以HNMR結(jié)構(gòu)鑒定。
  (5)以TBBPA和溴乙酸、3-溴丙酸為原料,通過加成反

5、應(yīng)等步驟得到半抗原TBBPA-D3和TBBPA-D4。
  (6)分別以TBBPA-D1-BSA和TBBPA-D2-BSA為免疫原免疫新西蘭白兔,得到了兩種多克隆抗體R1-1和R2-1。兩種抗體特異性較高,對類似結(jié)構(gòu)的化合物均無識別。基于R1-1所建立的ELISA方法,其IC50為73.2ng/mL,檢測限為18.53ng/mL;利用R2-1所建立的LISA方法,其IC50為51.0ng/mL,檢測限可達(dá)12.36ng/mL。由于

6、R2-1的靈敏度高于R1-1,因此R2-1被應(yīng)用于后期對于環(huán)境中TBBPA的相關(guān)研究(基于ELISA方法)。
  (7)以DHEE-M1-BSA為免疫原對新西蘭白兔進(jìn)行免疫,得到了一種多克隆抗體R3-2。此抗體可同時識別TBBPA-DHEE與四溴雙酚A單烯丙基醚(TBBPA-MHEE),但對其他類似結(jié)構(gòu)的化合物沒有交叉反應(yīng)?;赗3-2所建立的ELISA方法,其IC50為36.4ng/mL,檢測限為8.74ng/mL,因此R3-2

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