加替沙星-稀土鋱配合物在生命分析中的應(yīng)用.pdf

1、DNA作為遺傳信息的載體，其堿基的變異、缺失或者濃度的改變都會(huì)導(dǎo)致人類疾病的產(chǎn)生;ATP作為能量的載體，其濃度的紊亂會(huì)直接導(dǎo)致心血管病等疾病的產(chǎn)生。因此，DNA和ATP的檢測(cè)在臨床診斷、疾病預(yù)防和生物藥學(xué)等方面具有重要的意義。稀土離子配合物作為一種熒光探針，具有發(fā)射譜帶窄、化學(xué)穩(wěn)定好、水溶性好、熒光壽命長和生物相容性好等優(yōu)點(diǎn)，被廣泛用于生命分子的檢測(cè)中。
　　 本論文利用加替沙星-鋱配合物熒光體系分別檢測(cè)了DNA和ATP兩種生命

2、物質(zhì)，并就其發(fā)光機(jī)理進(jìn)行了初步的研究和探討。
　　 本論文共分為以下四部分:
　　 一、簡單概述了DNA和ATP的分子結(jié)構(gòu)、檢測(cè)的意義以及目前的檢測(cè)方法;較為具體地介紹了稀土離子以及稀土離子配合物作為熒光探針的特點(diǎn)及其在生命分析中的應(yīng)用。
　　 二、建立了加替沙星-鋱(Ⅲ)-小牛胸腺DNA(ctDNA)的熒光新體系并用于ctDNA的測(cè)定。ctDNA的加入能夠顯著地增強(qiáng)加替沙星-鋱(Ⅲ)體系的熒光強(qiáng)度，由此建立了加

3、替沙星-鋱(Ⅲ)-小牛胸腺DNA(ctDNA)的熒光新體系。在一定的ctDNA濃度范圍內(nèi)，熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)△F與ctDNA的濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，因此可以實(shí)現(xiàn)對(duì)ctDNA的定量檢測(cè)。在最佳條件下，在5.8×10-7gmL-1～2.0×10-5gmL-1的ctDNA濃度范圍內(nèi)，體系的△F值和ctDNA的濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，檢測(cè)限為2.2×10-7gmL-1。本章還對(duì)一些干擾物質(zhì)對(duì)體系的影響進(jìn)行了研究;并對(duì)合成水樣中的ctDNA進(jìn)行了檢

4、測(cè)，回收率在95％～102％之間;此外還對(duì)體系發(fā)光的機(jī)理進(jìn)行了初步的研究和討論。該方法無須進(jìn)行任何標(biāo)記，檢測(cè)過程簡單快速，重現(xiàn)性良好。
　　 三、建立了加替沙星-鋱(Ⅲ)-三磷酸腺苷(ATP)的熒光新體系并用于ATP的測(cè)定。ATP的加入能夠顯著地增強(qiáng)體系的熒光強(qiáng)度。在最佳實(shí)驗(yàn)條件下，在2.1×10-6molL-1～2.4×10-5molL-1的ATP濃度范圍內(nèi)，熒光強(qiáng)度的增強(qiáng)△F值和ATP的濃度呈現(xiàn)良好的線性關(guān)系，檢測(cè)限為1.9

5、×10-6molL-1。本章還對(duì)一些干擾物質(zhì)對(duì)體系的影響進(jìn)行了研究。該方法成功用于對(duì)ATP注射液的檢測(cè)，相當(dāng)于標(biāo)示量的百分含量在105％～111％之間。此外還利用熒光光譜、紫外吸收光譜等手段初步探討了體系發(fā)光的機(jī)理。
　　 四、結(jié)合酶催化循環(huán)放大和RCA擴(kuò)增試圖建立一種靈敏的均相溶液中的DNA檢測(cè)方法。在沒有目標(biāo)物DNA時(shí)，互補(bǔ)DNA呈現(xiàn)單鏈狀態(tài)，其在環(huán)狀模板，聚合酶，連接酶以及dNTP的存在下進(jìn)行RCA擴(kuò)增。加入與RCA擴(kuò)增產(chǎn)

6、物互補(bǔ)的探針DNA和內(nèi)插染料SYBRGreen(Ⅰ)后，體系中有較強(qiáng)的熒光信號(hào)。而當(dāng)體系中存在目標(biāo)DNA的時(shí)候，互補(bǔ)DNA與目標(biāo)DNA雜交形成雙鏈，ExoⅢ將互補(bǔ)DNA催化降解，釋放出目標(biāo)物，目標(biāo)物繼續(xù)與互補(bǔ)DNA形成雙鏈，互補(bǔ)DNA再被催化降解，如此循環(huán)使互補(bǔ)DNA被持續(xù)催化降解，被催化降解的互補(bǔ)DNA不能進(jìn)行RCA擴(kuò)增，因此熒光信號(hào)較弱。該方法中，每釋放一次目標(biāo)DNA，對(duì)應(yīng)一條被催化降解的互補(bǔ)DNA，而一條互補(bǔ)DNA又能對(duì)應(yīng)一條RC