2023年全國(guó)碩士研究生考試考研英語(yǔ)一試題真題(含答案詳解+作文范文)_第1頁(yè)
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1、目的:肺癌是中國(guó)目前死亡率非常高的惡性腫瘤,發(fā)病率與死亡率均居于首位,超過胃癌和食管癌。在中國(guó)這樣的發(fā)展中國(guó)家,隨著環(huán)境的污染以及中國(guó)的吸煙人數(shù)位居世界之首都造成了肺癌在中國(guó)的發(fā)病率逐年上升。然而目前肺癌的治療方法仍不是十分理想,手術(shù)治療僅適用于早期肺癌,五年生存率僅有15%。在肺癌的發(fā)病中,非小細(xì)胞肺癌約占肺癌總敉的80-85%。臨床一線的化療藥物對(duì)非小細(xì)胞肺癌有效率僅有40%,且容易產(chǎn)生耐藥性。因此,開發(fā)新的化療藥物和用藥策略成為目

2、前肺癌治療的首要任務(wù)。
  土木香是菊科多年生草本植物,土木香內(nèi)酯(Alantolactone,ALT)是土木香根莖中提取的有效成分。近年來在國(guó)內(nèi)外的研究中,土木香內(nèi)酯在宮頸癌、肝癌、乳腺癌,結(jié)直腸癌、腦膠質(zhì)瘤的治療中均有過明確的報(bào)道。在實(shí)驗(yàn)室的前期研究中也首次發(fā)現(xiàn)了土木香內(nèi)酯可以通過氧化應(yīng)激作用誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)胞凋亡,但需要使用大劑量才能完全誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡,劑量需達(dá)到40μM。于是,在進(jìn)一步的研究中力求探索一種同樣具有對(duì)

3、細(xì)胞造成氧化損傷的藥物與土木香內(nèi)酯共同應(yīng)用以加強(qiáng)土木香內(nèi)酯的抗肺癌作用。
  二酰胺(Diamide)是一種巰基氧化劑,國(guó)內(nèi)外研究以明確報(bào)道它能特異性地氧化還原型谷胱甘肽(GSH),降低細(xì)胞內(nèi)GSH過氧化物酶活性,引發(fā)細(xì)胞內(nèi)的過氧化損傷。但單獨(dú)應(yīng)用二酰胺對(duì)細(xì)胞造成氧化損傷的IC50濃度需達(dá)到2mM。
  綜上所述,本實(shí)驗(yàn)主要探索二酰胺是否可以通過誘發(fā)細(xì)胞內(nèi)氧化損傷作用,在與土木香內(nèi)酯共同應(yīng)用時(shí)加強(qiáng)土木香內(nèi)酯誘導(dǎo)肺癌A549細(xì)

4、胞凋亡的效應(yīng),且兩種藥物都不用使用較大劑量就可以達(dá)到很好的誘導(dǎo)凋亡作用,為臨床肺癌化療提供新的用藥策略。
  方法:1、體外培養(yǎng)非小細(xì)胞肺癌A549細(xì)胞。2、MTT實(shí)驗(yàn)檢測(cè)二酰胺與土木香內(nèi)酯共同用藥時(shí)A549細(xì)胞的增殖能力。3、光學(xué)顯微鏡觀察二酰胺與土木香內(nèi)酯共同用藥時(shí)A549細(xì)胞的形態(tài)變化。4、細(xì)胞生存死亡形成實(shí)驗(yàn)(Live/dead assay)檢測(cè)二酰胺與土木香內(nèi)酯共同用藥時(shí)A549細(xì)胞的死亡比例。5、Hoeshst3325

5、8凋亡細(xì)胞核染色實(shí)驗(yàn)檢測(cè)二酰胺與土木香內(nèi)酯共同用藥時(shí)A549細(xì)胞的凋亡數(shù)量。6、流式細(xì)胞術(shù)Annexin V-FITC/PI雙染色法檢測(cè)二酰胺與土木香內(nèi)酯共同用藥時(shí)A549細(xì)胞的凋亡比例。7、細(xì)胞內(nèi)活性氧(ROS)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)二酰胺與土木香內(nèi)酯共同用藥時(shí)A549細(xì)胞的活性氧生成量。8、細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位(MMP)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)二酰胺與土木香內(nèi)酯共同用藥時(shí)A549細(xì)胞的線粒體膜電位。9、細(xì)胞內(nèi)還原性谷胱甘肽/氧化型谷胱甘肽(GSH/GS

6、SG)檢測(cè)試劑盒檢測(cè)二酰胺與土木香內(nèi)酯共同用藥時(shí)A549細(xì)胞的還原型谷胱甘肽、氧化型谷胱甘肽以及GSSG/GSH的比值。10、Western blotting法檢測(cè)二酰胺與土木香內(nèi)酯共同用藥時(shí)A549細(xì)胞的STAT3信號(hào)通路相關(guān)蛋白STATA3、P-STAT3、SHP-1、Bax、Bcl-2、Cl-caspase-3、CI-PARP、JAK2、P-JAK2、PTEN等的表達(dá)。
  結(jié)果:1、MTT結(jié)果顯示二酰胺增強(qiáng)土木香內(nèi)酯抑制A

7、549細(xì)胞增殖的作用。2、光學(xué)顯微鏡觀察到:與對(duì)照組相比,二酰胺增強(qiáng)土木香內(nèi)酯對(duì)A549細(xì)胞的形態(tài)改變。3、細(xì)胞生存死亡形成實(shí)驗(yàn)、流式細(xì)胞術(shù)實(shí)驗(yàn)、.Hoeshst33258凋亡細(xì)胞核染色實(shí)驗(yàn)證實(shí)二酰胺增強(qiáng)土木香內(nèi)酯誘導(dǎo)A549細(xì)胞凋亡比例。4、細(xì)胞內(nèi)活性氧檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞內(nèi)線粒體膜電位檢測(cè)試劑盒、細(xì)胞內(nèi)GSH和GSSG檢測(cè)試劑盒檢測(cè)結(jié)果表明:與對(duì)照組相比,二酰胺增強(qiáng)土木香內(nèi)酯對(duì)A549細(xì)胞內(nèi)活性氧生成的提升,線粒體膜電位的降低,GSSG

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