基于生物功能色素衍生熒光探針及活細(xì)胞成像研究.pdf

1、基于苯并噻唑、萘酰亞胺、七甲川菁染料生物功能熒光色素，設(shè)計(jì)、合成了三種高靈敏熒光探針，分別利用了激發(fā)態(tài)分子內(nèi)質(zhì)子轉(zhuǎn)移(ESIPT)、熒光偏振技術(shù)(FP)、雙激發(fā)雙發(fā)射近紅外熒光響應(yīng)機(jī)制。進(jìn)行了基于熒光探針的活細(xì)胞成像研究。
　　(1)首次設(shè)計(jì)、合成了一種比值型熒光探針PDS-2，基于ESIPT原理，實(shí)現(xiàn)對(duì)高碘酸根的比值型定量檢測(cè)?；跓晒饧夹g(shù)的PDS-2能夠幫助我們更好地理解高碘酸根參與生物、化學(xué)反應(yīng)的作用機(jī)理。該探針可以被當(dāng)作一

2、種有用的工具，應(yīng)用于公共衛(wèi)生、食品安全以及環(huán)境保護(hù)等領(lǐng)域。
　　(2)首次設(shè)計(jì)、合成一種基于萘酰亞胺的熒光偏振探針BIO，用于腫瘤細(xì)胞的定量檢測(cè)。熒光偏振技術(shù)具有自校準(zhǔn)功能，精確度高。檢測(cè)過(guò)程可以在均相溶液中進(jìn)行，無(wú)需細(xì)胞裂解和進(jìn)一步的分離操作。實(shí)驗(yàn)表明，BIO對(duì)Hela細(xì)胞的最低檢測(cè)限約為85cells mL-1，線性范圍是2.5×102-1×106cells mL-1。萘酰亞胺熒光團(tuán)具有較長(zhǎng)的激發(fā)態(tài)熒光壽命和較好的光學(xué)穩(wěn)定性，

3、BIO適合于持續(xù)激發(fā)條件下的活細(xì)胞成像，通過(guò)細(xì)胞成像，可觀察到其與CD44蛋白過(guò)量表達(dá)細(xì)胞的特異性識(shí)別過(guò)程。
　　(3)基于七甲川花菁染料具有波長(zhǎng)較長(zhǎng)的近紅外熒光的特點(diǎn)，且菁染料具有剛性平面結(jié)構(gòu)和多個(gè)探針結(jié)合位點(diǎn)，同時(shí)結(jié)合血清白蛋白(以人血清白蛋白(HSA)作為代表）大分子在水溶液介質(zhì)中存在結(jié)構(gòu)選擇性的疏水空腔，空腔內(nèi)微環(huán)境極性較小可使染料的熒光強(qiáng)度增加的特點(diǎn)，設(shè)計(jì)、合成一種花菁染料熒光探針C7H，利用其與HSA結(jié)合的雙波長(zhǎng)熒光信

4、號(hào)增強(qiáng)作用，實(shí)驗(yàn)結(jié)果顯示合成的目標(biāo)探針與血清蛋白質(zhì)具有較強(qiáng)的位點(diǎn)特異性結(jié)合作用力，可以實(shí)現(xiàn)對(duì)于HSA的定量檢測(cè)，并應(yīng)用于人體尿液和血清的實(shí)際樣品定量分析。
　　(4)利用前期設(shè)計(jì)合成的基于FRET原理的比值型探針VTAF開(kāi)展了活細(xì)胞內(nèi)蛋白質(zhì)相鄰巰基的可視化動(dòng)態(tài)跟蹤研究。實(shí)驗(yàn)結(jié)果表明，有豐富的相鄰巰基蛋白質(zhì)位于線粒體。此外，一些氧化還原敏感的相鄰巰基蛋白位于細(xì)胞表面?；谠摫戎敌蜔晒鈧鞲屑夹g(shù)，可以較好的實(shí)現(xiàn)活細(xì)胞內(nèi)相鄰巰基蛋白質(zhì)的可