鉻和鎂聯(lián)合補(bǔ)充對(duì)糖耐量異?；颊哐h(huán)miRNA差異表達(dá)的研究.pdf

1、I分類號(hào)：R587密級(jí)：公開(kāi)UDC：610610學(xué)校代碼：11065博士專業(yè)學(xué)位論文鉻和鎂聯(lián)合補(bǔ)充對(duì)糖耐量異?；颊哐h(huán)鉻和鎂聯(lián)合補(bǔ)充對(duì)糖耐量異常患者循環(huán)miRNAmiRNA差異表達(dá)的研究差異表達(dá)的研究張方華指導(dǎo)教師閻勝利教授學(xué)位類別博士學(xué)位專業(yè)領(lǐng)域內(nèi)科學(xué)（內(nèi)分泌與代謝）答辯日期2017年11月17日答辯委員會(huì)主席何蘭杰主任醫(yī)師III預(yù)組，60人），干預(yù)時(shí)間為3個(gè)月。2.實(shí)驗(yàn)方法：鉻鎂干預(yù)組給予鉻（120μgd）鎂（200mgd）補(bǔ)充治療

2、。安慰劑對(duì)照組給予服用安慰劑。按照常規(guī)方法進(jìn)行血壓、體重和身高的測(cè)量。測(cè)定血糖、糖化血紅蛋白、空腹胰島素及血脂。3.RNA提?。好拷M隨機(jī)抽取5例受檢者10ml外周靜脈血于美國(guó)BD公司的VacutainerSSTTM采血管中。采用美國(guó)Qiagen公司的miRNeasy血清血漿提取試劑盒提取循環(huán)miRNA。質(zhì)控分析采用美國(guó)Agilent公司的生物分析儀2100系統(tǒng)進(jìn)行，所用試劑盒為AgilentRNA6000Nano和小RNA試劑盒。4.微

3、小RNA測(cè)序：采用IlluminaHiseq2000系統(tǒng)進(jìn)行miRNA的測(cè)序，文庫(kù)構(gòu)建采用KAPARNAHyperPrepKits，按照使用說(shuō)明書(shū)進(jìn)行操作。5.熒光定量PCR（qPCR）：miRNA的qPCR引物購(gòu)于廣州市銳博生物科技有限公司（ribobio）。采用SYBR法，Mastermix購(gòu)于美國(guó)ThermoFisher公司。采用2ddCT法進(jìn)行數(shù)據(jù)分析，內(nèi)參基因?yàn)镽NU6B、miR454、miR425。6.miR1825p和mi

4、R965p靶基因的預(yù)測(cè)分析：采用軟件TargetScan（v6.2）、Mira（20101101）和MicrocosmV5進(jìn)行miR1825p和miR965p靶基因的預(yù)測(cè)，采用軟件Vennytool（v2.0.2）進(jìn)行上述三個(gè)預(yù)測(cè)軟件共同靶基因的篩選。7.miR1825p和miR965p功能富集分析：上述預(yù)測(cè)出的共同靶基因進(jìn)行g(shù)eneontology（GO）與KyotoEncyclopediaofGenesGenomes（KEGG）信號(hào)

5、通路分析，采用的軟件為美國(guó)Arraystar公司的分析軟件。8.靶基因驗(yàn)證：將miRNA的agomir或antagomir與帶有報(bào)告基因的載體共同導(dǎo)入HITT15胰島β細(xì)胞中，通過(guò)熒光強(qiáng)度值的變化來(lái)反應(yīng)目的miRNA與預(yù)測(cè)靶基因的結(jié)合情況。9.統(tǒng)計(jì)學(xué)方法：采用GraphPad軟件，qPCR的結(jié)果以?xSEM表示。臨床數(shù)據(jù)采用均數(shù)標(biāo)準(zhǔn)差(?xSD)的形式表示。統(tǒng)計(jì)學(xué)分析采用軟件GraphPad自帶的數(shù)據(jù)分析功能進(jìn)行操作。應(yīng)用非配對(duì)t檢驗(yàn)進(jìn)