寡雄腐霉的拮抗作用及寡雄蛋白的誘導(dǎo)抗性研究.pdf

1、大多數(shù)腐霉Pythium Pringsheim是植物的重要病原菌，但有些腐霉不僅對(duì)植物沒(méi)有致病作用，且對(duì)多種病原菌具有拮抗與重寄生的作用，并能誘導(dǎo)植物產(chǎn)生系統(tǒng)抗性，其中寡雄腐霉Pythium oligandrum Drechsler最受關(guān)注。本論文對(duì)寡雄腐霉的分離檢測(cè)方法進(jìn)行了比較；初步研究了寡雄腐霉對(duì)多種病原真菌的拮抗作用；對(duì)寡雄蛋白進(jìn)行了分離純化，并制備了多克隆抗體；初步探明了寡雄蛋白誘導(dǎo)黃瓜對(duì)灰霉病的抗性及其機(jī)理。本論文的研究結(jié)果

2、摘要如下： 1.從54份不同來(lái)源的土壤中，采用SSDP法、埋玻片誘集法和撒土誘集法對(duì)寡雄腐霉進(jìn)行了分離鑒定，結(jié)果表明無(wú)論是在蔬菜土、海島蔬菜砂土、草坪土還是水稻土中均可分離到寡雄腐霉，其中撒土誘集法分離到的寡雄腐霉數(shù)最多，分離出的寡雄腐霉最易純化。同時(shí)比較了用黃色鐮刀菌、茄絲核菌和灰葡萄孢三種真菌誘集分離寡雄腐霉的效果，結(jié)果是用黃色鐮刀菌最為有效。 2.通過(guò)平板對(duì)峙培養(yǎng)對(duì)寡雄腐霉與8種重要植物病原真菌及2種人體足癬病原菌

3、(紅色毛癬菌和石膏樣毛癬菌)的作用進(jìn)行了研究，結(jié)果表明寡雄腐霉能有效地抑制這8種植物病原真菌的菌絲生長(zhǎng)，對(duì)石膏樣毛癬菌和紅色毛癬菌也有抑制作用。環(huán)境掃描電鏡觀察表明，寡雄腐霉對(duì)尖孢鐮刀菌黃瓜?；秃蛢煞N毛癬菌都有明顯的重寄生作用，寡雄腐霉與病原菌的菌絲體緊密接觸后，寄主菌細(xì)胞壁變薄、扭曲，原生質(zhì)膜縊縮或破裂，原生質(zhì)凝集成團(tuán)或流出，菌絲體干癟、萎縮、破裂，最后死亡，而寡雄腐霉菌絲仍然健康、飽滿、光滑。 3.對(duì)寡雄腐霉的液體培養(yǎng)基配

4、方進(jìn)行了優(yōu)化，在PO培養(yǎng)液中加1/2 PDB能使寡雄腐霉分泌出更多的寡雄蛋白。用硫酸銨沉淀法結(jié)合SDS-PAGE法，PF-2D法檢測(cè)，分離純化出分子量約為10KDa，等電點(diǎn)為4.5左右的純寡雄蛋白。用EDAC和OVA雙偶聯(lián)的抗原、直接凝膠磨碎的抗原和EDAC單偶聯(lián)的抗原分別對(duì)雄性大白兔經(jīng)過(guò)5次免疫后，獲得了寡雄蛋白的多克隆抗體。用雙偶聯(lián)的比用單偶聯(lián)的抗原，能獲得效價(jià)更高的多克隆抗體。 4.對(duì)寡雄蛋白誘導(dǎo)黃瓜產(chǎn)生的系統(tǒng)獲得抗性進(jìn)行